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在飼料中添加抗生素可促進畜禽生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率以及預(yù)防和治療疾病，但抗生素的長期大量使用會造成有害菌的耐藥性及畜產(chǎn)品藥物的殘留，食用藥物殘留的畜產(chǎn)品會使人產(chǎn)生過敏反應(yīng)、中毒等危害，損害人類健康。目前微生態(tài)制劑作為抗生素的替代品，被廣泛使用。謝全喜等研究發(fā)現(xiàn)飼喂添加2%的微生態(tài)試劑組肉雞生長性能顯著高于對照組與抗生素組;肉雞17日齡和24日齡時，飼喂添加2%的微生態(tài)試劑組肉雞血清免疫球蛋白G含量分別比抗生素組增加24.3%和16.2%，且差異顯著。胡順珍等研究表明，飼喂微生態(tài)試劑組肉雞盲腸中大腸桿菌與乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組。Newbold等報道微生態(tài)制劑能夠改善動物的腸道有益菌群，抑制有害菌生長，從而促進動物生長發(fā)育，提高飼料利用率，同時還克服了藥殘留和耐藥性的缺點。但在飼料加工過程中微生態(tài)試劑也存在損耗較大的問題。王超研究微生態(tài)制劑在沒有添加保護劑等保護措施下，制粒工藝中調(diào)質(zhì)時間極顯著影響了微生態(tài)制劑中乳酸菌、酵母菌和芽胞桿菌活菌數(shù)量。李鑫等研究在飼料制粒后，芽孢桿菌的存活率較高，乳酸菌則比較脆弱，不能抵抗制粒時的溫度和壓力等加工條件。以上研究是針對飼料加工后微生態(tài)制劑的損失情況或者對微生態(tài)制劑對肉雞生長性能等指標(biāo)的研究，而針對有關(guān)飼料加工工藝對微生態(tài)制劑損失的影響及其對肉雞生長性能和免疫功能的影響研究較少。因此，本試驗通過研究普通調(diào)質(zhì)制粒(OT)工藝和大料高溫調(diào)質(zhì)低溫制粒(ET)工藝對復(fù)合微生態(tài)制劑活性及飼料質(zhì)量的影響，以及不同加工工藝和復(fù)合微生態(tài)制劑替代抗生素對肉雞生長性能和免疫功能等的影響，為微生態(tài)制劑在肉雞飼料中的應(yīng)用及加工工藝的選擇提供參考依據(jù)。

1.1 試驗飼糧

基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

OT工藝將所有原料粉碎配料混合后調(diào)質(zhì)制粒，前期料粉碎采用2.0mm篩片孔徑，后期料粉碎采用2.5mm篩片孔徑，制粒機環(huán)模模孔直徑3mm、長徑比10∶1，調(diào)質(zhì)溫度75℃，調(diào)質(zhì)時間約為30s;ET工藝先將飼糧中的大料粉碎配料混合(粉碎粒度同OT工藝)，再在85℃調(diào)質(zhì)溫度下進行熟化處理，經(jīng)冷卻后與預(yù)混料、微生態(tài)制劑等二次配料混合調(diào)質(zhì)時間約為30s，再經(jīng)60℃調(diào)質(zhì)溫度下制粒成型，調(diào)質(zhì)時間約為30s。

1.3 試驗動物與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院南口養(yǎng)殖基地進行，選用864只1日齡白羽愛拔益加(AA)肉仔雞，初始體重為(48.00±0.05)g，按照性別比例一致原則隨機分為8組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)18只雞，進行為期42d的飼養(yǎng)試驗，分為前期(1～21日齡)和后期(22～42日齡)2個階段，前期飼喂破碎料，后期飼喂顆粒料。

飼養(yǎng)管理參照AA肉仔雞的飼養(yǎng)管理手冊進行，試驗期間做好光照、溫度的控制，保持良好的通風(fēng)，定期消毒、清糞和打掃雞舍，按照免疫程序做好疫苗的免疫，觀察雞只的狀況，做好死淘記錄，自由采食自由飲水，做好飼料采食記錄。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 菌落總數(shù)與菌種存活率

枯草芽孢桿菌檢測采用GB/T26428—2010《飼用微生物制劑中枯草芽孢桿菌的檢測》;地衣芽孢桿菌檢測采用NY/T1461—2007《飼料微生物添加劑地衣芽孢桿菌》;包被乳酸菌檢測采用破囊液溶解后，以生理鹽水為稀釋劑做10倍遞增稀釋，取適宜梯度稀釋液涂于滅菌后的瓊脂平板中，待37℃、48h溫育，計數(shù)。

菌種存活率(%)=100×調(diào)質(zhì)后活菌數(shù)或制粒后活菌數(shù)/調(diào)質(zhì)前活菌數(shù)或制粒前活菌數(shù)。

1.4.2 顆粒硬度

樣品顆粒硬度的測定參照《飼料檢驗化驗員》中顆粒飼料硬度的測定方法檢測。

1.4.3 顆粒耐久性(PDI)

PDI檢測采用美國農(nóng)業(yè)工程協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)方法。

1.4.4 淀粉糊化度

淀粉糊化度檢測采用美國飼料工業(yè)界普遍采用的測定淀粉糊化度的簡易酶法測定。

1.4.5 生長性能

分別于試驗第21天與第42天結(jié)束前1天晚上開始控料，自由飲水，使試驗雞空腹24h，于第21天與第42天次日早上逐只稱重，以重復(fù)為單位計算各組試驗雞的平均體重。準(zhǔn)確記錄每天耗料量，出現(xiàn)死雞時截料稱重，計算各階段總耗料量。

平均日采食量(ADFI)=總耗料量/(只數(shù)×天數(shù));

平均日增重(ADG)=總增重/(只數(shù)×天數(shù));

料重比(F/G)=總耗料量/總增重。

1.4.6 免疫器官指數(shù)

于42日齡每個重復(fù)隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，摘取脾臟和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(mg/g)=免疫器官重(mg)/活體重(g)。

1.4.7 盲腸微生物數(shù)量

于42日齡每個重復(fù)隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，無菌分離盲腸，取其內(nèi)容物，采用平板培養(yǎng)計數(shù)法分別計數(shù)腸道乳酸菌、沙門氏菌和大腸桿菌數(shù)。菌群數(shù)量以每克腸道內(nèi)容物所含細菌群落總數(shù)的對數(shù)［1g(CFU/g)］表示。

1.4.8 血漿生化指標(biāo)

于42日齡每個重復(fù)隨機選取1只肉雞，頸靜脈放血處死，分別取血樣于促凝管中，離心，取血漿，采用試劑盒測定血漿尿素氮、總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性等生化指標(biāo)，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示。所有數(shù)據(jù)用軟件SAS9.2進行單因素方差分析(oneway ANOVA)和復(fù)因子試驗統(tǒng)計分析，用Duncan氏法多重比較檢驗差異的顯著性，顯著水平為P＜0.05，極顯著水平為P＜0.01。

2結(jié)果與分析

2.1 飼料加工工藝對微生態(tài)制劑活性的影響

飼料加工工藝對微生態(tài)制劑活性的影響見表3。由表可知，肉雞生長前期飼料調(diào)質(zhì)后枯草芽孢桿菌與包被乳酸菌的菌落總數(shù)和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，地衣芽孢桿菌的菌落總數(shù)和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05);肉雞生長前期飼料制粒后枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的菌落總數(shù)和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，包被乳酸菌的菌落總數(shù)和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05)。肉雞生長后期飼料調(diào)質(zhì)后包被乳酸菌的菌落總數(shù)和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌落總數(shù)和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05);肉雞生長后期飼料制粒后包被乳酸菌的菌落總數(shù)和存活率ET工藝顯著高于OT工藝(P＜0.05)，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的菌落總數(shù)和存活率2種工藝間差異不顯著(P＞0.05)。

3.2 飼料加工工藝對飼料顆粒質(zhì)量的影響

隨著飼料配方的逐漸完善，飼料加工工藝對飼料質(zhì)量有重要的影響。孫杰研究大料膨脹低溫制粒組的顆粒耐久性、淀粉糊化度與硬度顯著高于普通制粒組。本試驗研究表明肉雞生長前期、后期飼料制粒后ET組硬度、淀粉糊化度和顆粒耐久性顯著高于OT組，這是由于ET組大料經(jīng)過85℃以上的調(diào)質(zhì)溫度，使大料充分糊化，增加其糊化度，促使物料淀粉由緊密的β－淀粉轉(zhuǎn)化為糊化的α－淀粉，蛋白變性從而增加物料黏合性，并且經(jīng)過低溫制粒后物料粘合更加緊密，因此硬度與顆粒耐久性較OT組更高。

3.3 飼料加工工藝和復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞生長性能的影響

復(fù)合微生態(tài)制劑自身具有促進動物生長，提高免疫力等功能。王虹玲等研究報道添加0.2%的復(fù)合微生態(tài)制劑和添加2.5%的黃氏多糖有助于改善肉雞的ADG與F/G。郝生宏等研究添加益生菌的試驗組與對照組相比，在第1周和第2周，生長性能出現(xiàn)不同程度下降，但第3周有所改觀。陳家祥等發(fā)現(xiàn)添加50mg/kg地衣芽胞桿菌組生長性能比對照組有所提高，但添加200mg/kg地衣芽抱桿菌組肉雞28日齡時F/G反而有所上升。本試驗結(jié)果表明復(fù)合微生態(tài)制劑在促進肉雞生長性能方面效果并不顯著，這可能是由于肉雞生長前期添加微生態(tài)制劑，微生態(tài)制劑誘導(dǎo)肉雛雞產(chǎn)生比較強烈的免疫反應(yīng)，而免疫應(yīng)激導(dǎo)致生長性能改善不顯著。同時，王昊等研究表明從總體生長性能來看，僅ADFI在添加16.92%膨化玉米組中顯著高于添加5.64%膨化玉米組，其他生長性能指標(biāo)各組之間沒有顯著差異，飼料淀粉糊化度的提高對肉雞生長性能無顯著影響。本試驗研究表明，OT組肉雞生長性能優(yōu)于ET組，這與王昊等研究不一致。這可能是由于肉雞自身特殊的生理特點，飼料淀粉糊化度升高，易于消化，食糜排空速度快，在體內(nèi)營養(yǎng)吸收時間較短，從而不能使生長性能有所提升。

3.4 飼料加工工藝和復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞免疫器官指數(shù)和盲腸微生物數(shù)量的影響

免疫器官包括中樞免疫器官和外周免疫器官。脾臟是禽類最大的外周免疫器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答;法氏囊是禽類特有的體液免疫中樞器官，是B細胞分化發(fā)育的主要場所。中樞和外周免疫器官免疫功能的強弱決定禽類全身的免疫水平，免疫器官指數(shù)大小反映免疫系統(tǒng)成熟的快慢與機體免疫功能的強弱。程相朝等研究發(fā)現(xiàn)中藥免疫增強劑組法氏囊和脾臟等免疫器官指數(shù)高于空白對照組;王媚等研究肉雞35日齡時，飼糧添加微生態(tài)制劑的試驗組法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)分別比對照組提高了40.12%和19.30%。由此可見微生態(tài)制劑可提升機體的免疫功能。徐海燕等發(fā)現(xiàn)肉雞33日齡時，飼喂倍利素的試驗組脾臟指數(shù)比對照組提高55.1%，差異顯著;26日齡時，試驗組法氏囊指數(shù)比對照組提高65.7%，差異顯著。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，肉雞脾臟指數(shù)各組間差異不顯著，其中在相同加工工藝條件下，金霉素和復(fù)合微生態(tài)制劑添加量為0和200mg/kg時肉雞脾臟指數(shù)最高，這也說明了添加復(fù)合微生態(tài)制劑對可一定程度提升肉雞免疫能力;2種加工工藝對肉雞免疫器官指數(shù)影響差異不顯著，其中ET組效果略好于OT組，原因可能是由于ET工藝可以提高菌種保留率，從而提高免疫能力。

元娜等研究表明，在基礎(chǔ)飼糧中添加1.5g/kg復(fù)合微生態(tài)制劑，每克盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量較對照組降低37.51%，乳酸菌數(shù)量較對照組提高1.92%。胡順珍等研究表明，添加2.0%復(fù)合微生態(tài)制劑A和0.5%復(fù)合微生態(tài)制劑佐劑B時，肉雞盲腸乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組，大腸桿菌數(shù)量顯著低于對照組。本試驗中，在相同加工工藝條件下，金霉素和復(fù)合微生態(tài)制劑添加量為300和200mg/kg組大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量最低，乳酸菌數(shù)量最高，這可能是由于抗生素自身也具有抑制腸道內(nèi)有害菌調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，在合理添加量內(nèi)與微生態(tài)試劑合用，免疫效果更好;2種加工工藝對腸道維生素數(shù)量影響差異不顯著，其中ET組效果略好于OT組，這可能是由于ET組與OT組相比菌種活性略高，復(fù)合微生態(tài)制劑中芽孢桿菌可為乳酸菌生長創(chuàng)造厭氧環(huán)境，降低腸道內(nèi)氧化還原電勢，抑制大腸桿菌與布氏桿菌等有害微生物的生長，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，從而起到抗菌防病的作用。

3.5 飼料加工工藝和復(fù)合微生態(tài)制劑對肉雞血漿生化指標(biāo)的影響

血清中總蛋白、白蛋白與球蛋白可以反映動物機體的免疫功能狀態(tài)，血清中總蛋白反映了飼糧中粗蛋白質(zhì)的消化利用率，其含量為白蛋白與球蛋白的總和。血清總蛋白及白蛋白含量的升高是蛋白質(zhì)旺盛的表現(xiàn)，表明氨基酸、蛋白質(zhì)的吸收利用率提高，機體肝臟的蛋白質(zhì)合成代謝及組織蛋白質(zhì)的沉積作用增強，進而提高動物生產(chǎn)性能;血清球蛋白由漿細胞分泌，可以反映動物機體的抵抗力水平。白球比反映脾臟的功能狀況，同時也是衡量機體免疫水平的一項指標(biāo)。白球比值的下降說明機體特異性免疫應(yīng)答水平提升，抗病力在增強。Abdulrahim等研究表明，益生菌具有提高血清中總蛋白、白蛋白和球蛋白含量的功能;陳靜等試驗結(jié)果顯示，2.0%的復(fù)合微生態(tài)制劑顯著增加了14、21、28和35日齡肉雞血清總蛋白含量;謝為天等研究表明，復(fù)合微生態(tài)制劑能使試驗雞血清總蛋白含量上升，且白蛋白和球蛋白含量都有所增加，白球比值下降。本試驗研究表明，在相同加工工藝條件下，金霉素和復(fù)合微生態(tài)制劑添加量為300和200mg/kg組效果稍好，這可能是由于復(fù)合微生態(tài)試劑與適量抗生素兩者可使動物體內(nèi)氨基酸代謝旺盛，蛋白質(zhì)分解代謝下降，合成代謝加強，有利于蛋白質(zhì)在體內(nèi)的蓄積;2種加工工藝對肉雞血漿生化指標(biāo)的影響差異不顯著，其中ET組效果稍好于OT組，這可能是由于ET組與OT組相比提高了飼料中微生態(tài)制劑的存活率。