4、飼養管理與樣品采集

試驗魚暫養2周后,挑選大小基本一致、鱗片完整且采食正常的斜帶石斑魚270尾,初始體重為12.6g,隨機放入9個體積為100cm×60cm×80cm的網箱中,每個網箱30尾。將9個網箱同置于一個長方形水泥池中,隨機分成3組,每組3個網箱（重復）。飼養試驗持續8周,每天08:00和16:00進行飽食投喂,每2d進行1次吸糞,養殖水源為過濾海水,水溫22.5-30.0℃,溶解氧濃度大于5.7mg/L。

養殖試驗結束后,經過24h禁食,將每個網箱的試驗魚分別撈出稱重,每個網箱隨機撈取6條魚用MS-222麻醉,尾靜脈采血,全血（01%肝素鈉抗凝）收集在離心管中,離心（2500m/min）10min后收集血漿,于-80℃冰箱保存；采血后解剖取肝臟稱重后于-80℃冰箱保存。

5、指標測定

5.1 生長性能指標

根據試驗所測定和記錄的數據計算增重率（weight gain rate,WGR）、特定生長率（specific growth rate,SGR）、攝食率（daily feeding intake,DFI）飼料效率（feed efficiency ratio,FER）、肝體比（hepaticsomatic index,HSI）、成活率（survivalrate,SR）。生長性能指標的計算公式如下：

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0；

特定生長率（%/d）=100×（lnWt-lnW0）/t；

攝食率（%/d）=100×Wf/（Wt/2+W0/2）/t；

肝體比（%）=100×W1/Wt；

成活率（%）=100×Nf/Ni。

式中:W0為試驗魚的初始體重（g）；Wt為試驗魚的終末體重（g）；Wf為攝食飼料的總量（g）；W1為肝臟重量（g）；t:為投喂天數（d）；Ni為試驗初始魚尾數；Nf為試驗終末魚尾數。

5.2 血漿生化指標

血漿堿性磷酸酶（AKP）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）活性與總膽固醇（T-CHO）、總蛋白（TP）含量采用相應試劑盒測定,試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

5.3肝臟抗氧化指標

肝臟過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量采用相應試劑盒測定,試劑盒購于南京建成生物工程研究所。肝臟蛋白質含量采用喹啉酸（BCA）法蛋白質定量測試盒測定,測試盒購于南京建成生物工程研究所。

6、數據處理與分析

試驗數據用平均值±標準誤（mean±SE）表示。采用SPSS 20.0軟件進行數據統計和分析,先對數據進行方差齊性檢驗,如滿足方差齊性條件則對數據進行單因素方差分析（one-way ANOVA）,若組間存在顯著性差異,則采用 Duncan氏法進行多重比較檢驗組間差異顯著性,以P<0.05表示差異顯著。

結果

1、飼料中添加不同水平的發酵銀杏葉對斜帶石斑魚生長性能的影響

由表2可知，包含增重率、特定生長率、肝體比在內的各生長性能指標在各組之間均沒有顯著差異（P>0.05）。

2、飼料中添加不同水平的發酵銀杏葉對斜帶石斑魚血漿生化指標的影響

由表3可知,飼料中添加0.25%或0.50%發酵銀杏葉對斜帶石斑魚血漿中AKP活性與T-CHO、TP含量均無顯著影響（P>0.05）。與對照組相比，飼料中添加0.25%發酵銀杏葉對血漿中AST活性沒有產生顯著影響（P>0.05）,但添加0.50%發酵銀杏葉則使血漿中AST活性顯著下降（P<0.05）；此外,飼料中添加0.25%或0.50%發酵銀杏葉均可顯著降低血漿中ALT活性(P<0.05)。

3、飼料中添加不同水平的發酵銀杏葉對斜帶石斑魚肝臟抗氧化指標的影響

由表4可知,添加發酵銀杏葉的2個試驗組的肝臟SOD活性均顯著高于對照組(P<0.05),且肝臟SOD活性有隨發酵銀杏葉添加水平增加而升高的趨勢;肝臟GSH-Px活性隨著發酵銀杏葉添加水平的增加而顯著升高(P<0.05);肝臟CAT活性在發酵銀杏葉添加水平為0.50%時達到最高,顯著高于未添加發酵銀杏葉和發酵銀杏葉添加水平為0.25%時（P

討論

逯巖等發現在團頭魴飼料中添加0.25%或0.50%發酵銀杏葉均能夠顯著提高團頭魴幼魚的增重率與特定生長率,并可降低飼料系數。而在本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%或0.50%發酵銀杏葉,對其增重率、特定生長率、攝食率與成活率均未產生顯著影響。Tan等在石斑魚的高脂飼料中添加0.05%～0.40%銀杏葉提取物并未顯著改變其增重率、特定生長率、攝食率與成活率,與本試驗結果類似。這可能是由于石斑魚屬于肉食性魚類,飼料中會添加高比例的魚粉來提高飼料中蛋白質的品質,使得石斑魚的生長性能達到較高水平,再提高較難,這說明發酵銀杏葉在石斑魚上呈現出的主要作用可能在于提高免疫能力或抗氧化能力方面,并且在0.25%與0.50%添加水平下不會對其生長性能產生負面影響。

血液中T-CHO的含量能夠在一定程度上揭示魚體脂類代謝的情況,反映肝臟的健康程度,當魚體脂肪代謝紊亂、肝臟受到損傷時,血液中T-CHO的含量往往會升高,Yan等研究發現,銀杏多糖能夠抑制非酒精性脂肪肝引發的代謝紊亂；Jeong等研究表明,銀杏葉提取物有減少脂類在肝臟過度沉積的作用；Tan等在珍珠龍膽石斑魚的高脂飼料中加入0.05%-0.20%銀杏葉提取物后,顯著降低了血液中甘油三酯（TG）、T-CHO與肝臟粗脂肪含量；而本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%或0.50%發酵銀杏葉后,相比對照組,肝體比有降低的趨勢,血漿T-CHO含量有所下降,且有隨著添加水平的增加而降低的趨勢,但差異均未達到顯著水平,可能是本試驗中各試驗飼料中碳水化合物、粗脂肪等營養成分含量適中,故未形成顯著差異。此外,本試驗發現,飼料中添加發酵銀杏葉有降低中血漿AKP活性、T-CHO與TP含量的趨勢,表明發酵銀杏葉中的活性成分有影響機體蛋白質合成與脂肪代謝的作用,降低無機磷源的吸收與營養物質的轉運效率，如果過量添加可能會影響魚體正常的生長發育。

AST與ALT是肝臟內的2類重要的轉氨酶，在氨基酸的代謝中起重要作用,當肝細胞結構受到破壞時,AST與ALT作為肝細胞的胞內酶,進入到血液中,所以血液中AST與ALT的活性可以代表肝臟的健康狀態。張碩等的研究發現藥用植物所含的黃酮類化合物具有抗四氯化碳（CCl4）致小鼠肝纖維化的作用，能夠顯著降低小鼠血液中AST與ALT活性,而黃酮類化合物又是發酵銀杏葉中的主要成分之一。本試驗中,在斜帶石斑魚飼料中添加0.25%的發酵銀杏葉時,血漿中AST活性相對對照組略有下降而ALT活性則顯著降低,發酵銀杏葉添加水平為0.50%時,血漿中AST與ALT活性相對對照組均顯著降低,說明發酵銀杏葉具有維持斜帶石斑魚肝臟細胞正常結構與功能的作用,但同時也降低了氨基轉移活力,這也是添加發酵銀杏葉未能提高斜帶石斑魚生長的原因之一。

機體中的SOD能夠催化超氧陰離子（O2-）歧化為過氧化氫（H2O2）和氧氣（O2）；GSH-Px是一種在還原過氧化物過程中起重要作用的酶,能夠降低過氧化物對機體的傷害；體內產生的H2O2經過CAT催化分解或利用,避免氧化損傷；MDA是具有細胞毒性的物質,是體內過氧化過程的最終產物,其含量的升高反映體內抗氧化能力。曹建等的研究表明,銀杏葉有降低血液MDA含量與提升SOD活性的作用；太海燕等的研究發現,銀杏葉提取物可以通過降低肝臟MDA含量緩解小鼠的急性酒精性肝損傷,Niu等的研究表明在肉雞飼糧中添加發酵銀杏葉可以提升肝臟GSH-Px和SOD活性,從面提高肉雞肝臟的總抗氧化能力。本試驗數據顯示,攝食添加發酵銀杏葉飼料的斜帶石斑魚,其肝臟SOD、GSH-Px、CAT活性顯著高于對照組，MDA含量顯著低于對照組,且0.50%添加水平較0.25%添加水平作用更為明顯,表明發酵銀杏葉對于提升斜帶石斑魚清除自由基能力與抗氧化能力有顯著作用,這可能是銀杏葉中的有效生物活性成分黃酮類、銀杏多糖與萜類內酯化合物共同發生作用的結果,其具體機制還有待進一步研究。

在我們前期的離體試驗中發現,發酵銀杏葉對H2O2誘導的斜帶石斑魚肝細胞損傷具有顯著的保護作用,能夠顯著降低細胞上清液中AST與ALT的活性,并顯著提高細胞GSH-Px活性與總抗氧化能力,顯著降低細胞MDA含量,本試驗結果進一步印證了離體試驗的結果。

結論

飼料中添加發酵銀杏葉并未對斜帶石斑魚的生長性能產生負面影響,還能夠提高斜帶石斑魚的肝臟抗氧化能力,且添加水平為0.50%時效果優于添加水平為0.25%時。

二十余年酶菌結合發酵經驗積累，更輕易成功的生物飼料發酵劑，簡單好用的中草藥發酵劑，在2021年11月再次升級科學地將多糖性復合菌種營養基組合運用，功能更強效果更好，但運用成本更低。

特別提醒：如果是第一次制作發酵飼料、需要發酵的原料霉變或變質較重、發酵環境溫度較低（低于15℃）、粗纖維較高、需要加快發酵速度或者需要制作出更加香醇高品質的生物發酵飼料出來等情況，請按照本產品說明書使用量增加2-3倍的使用量即可。

【原料組成】釀酒酵母、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、產朊假絲酵母菌、副干酪乳桿菌、曲霉菌、木霉菌、米曲霉、復合酶制劑、載體等；包裝內的小塑料袋中為多糖性復合菌種營養基由多糖性糖蜜、植物性蛋白胨、酵母膏、微量元素、維生素等組成。

【產品成分分析保證值】乳酸菌、釀酒酵母等合計≥100億cfu/g，水分＜9.0%（指包裝內的粉劑部分）。

凈重：500 克/袋（菌種+酶制劑300克，多糖性復合菌種營養基200克）。

請注意：本產品升級較大，與過去的使用方法有不少變化，請細看說明書進行運用。

（南寧微瑞生物科技有限公司是廣西助農畜牧科技有限公司的直屬下屬公司）

【產品特點】

1.本產品采用以高濃度乳酸菌（300億/g）為主要原料，結合了復合益生菌、口味改良劑、酸化劑的諸多優點，能夠發酵處理各種飼料原料、青綠飼料、秸稈粗飼料、各類食品加工下腳料糟渣等成為營養豐富的飼料，且能夠降解飼料中的抗營養因子，提高飼料在動物腸道中的消化吸收利用率，是降低飼料成本、改善動物肉品質、改善養殖場環境（臭味氨氣下降非常明顯）的好方案，使用后養殖環境形成益生菌環境，對動物健康有較好的保健作用。

2.升級后將原來的大部分輔料去掉，創新地將菌種激活和繁殖所需的專業多糖性復合菌種營養基溶于到產品中，不僅降低了大量使用紅糖或玉米等含淀粉原料的使用降低成本，且明顯提高了運用效果。

3.對霉變飼料及飼料原料具有脫霉作用，霉菌在厭氧發酵環境中無法生存，達到脫霉效果；對棉菜粕具有脫毒作用，通過酶制劑對抗營養因子的分解，并在發酵的過程中產生小肽。

4.產品中另外添加了新型增甜增香菌種，明顯改善發酵料的適口性，使得處理后的發酵料增香增甜，動物對發酵料更愛吃。

5. 客戶鑒別本產品真假和一些發酵劑產品比較效果的簡單方法：500~600毫升的空塑料瓶裝入50克大米，倒入200毫升不超過40℃的干凈溫水，加入本品粉劑與配套的多糖性復合菌種營養基各2-5克，蓋上蓋子搖動一下后放在溫度30℃左右環境中每天幾次小心放氣，2～3天大米基本溶解成乳狀。假冒發酵劑幾乎不能溶解大米（也就是分解效果差），無大氣體產生、發酵速度慢和香甜度差等，效果對比一目了然。

【產品使用方法】

一、制作液體菌液（保健菌液與加強型EM菌液）

將本品中的粉劑和多糖性復合菌種營養基溶于15公斤的溫水中（不高于45℃）密封發酵72小時以上（注意放氣安全），就成為酶菌結合的益生保健菌液（加強型EM菌）要求長期密封保存一年以上有效，長期在畜禽水產養殖動物上按照飼料重量的3%-5%拌入飼料中飼喂，飲水按照2%添加，動物會非常喜吃，動物各階段（包括孕畜）均可長期使用。

二、處理全價或自配飼料成無抗飼料

本品500-1000克先放入10-20公斤溫水中激活2小時以上，全價顆粒飼料1000公斤（可以加入中草藥20公斤效果更好），清水600公斤，混勻后放入陶瓷或者塑料桶中嚴格密封，3天后開始使用。使用時發酵的全價飼料10-20%，未發酵的全價飼料80-90%，周圍疫情高發期發酵的全價飼料增加到20-30%，使用后具有明顯的保健效果與提高消化降低料耗的作用。

→長期在豬飼料中添加部分發酵全價飼料對比效果明顯；→長期飼喂部分發酵全價飼料對豬生長、糞便臭味物質、血清抗氧化及免疫性能指標的影響

三、發酵木薯渣、豆渣、米粉面條加工下腳料、工廠學校剩飯、米糠、統糠、菌糠、酒糟、果渣果皮、青秸稈、牧草、紅薯藤等原料

本品500-1000克先放入10-20公斤溫水中激活2小時以上，1噸待發酵原料（部分原料需要粉碎），含淀粉類的飼料100公斤（比例約為原料的5%以上，如玉米、大米、紅薯、淀粉均可，也可以用3公斤以上多糖性復合菌種營養基代替）、食鹽2公斤（含有足量食鹽的原料則不添加，食鹽不能放在激活的菌種中，要直接撒在發酵料上或需要添加的清水中，下同）。含水量調節到55%-60%左右，壓實密封發酵7天左右有濃郁香味時即可使用。發酵后的料適口性、營養、消化率較未發酵前有明顯提升。發酵后的飼料根據不同動物與不同飼養周期按照10%-50%與該動物其他全價飼料混合后飼喂，不可以單獨飼喂或全部飼喂發酵飼料。

四、霉變的飼料及飼料原料脫霉

每1噸霉變飼料或飼料原料添加本品2包（1000克）先放入20公斤溫水中激活2小時以上，玉米粉400公斤（霉變原料中含有能量飼料如玉米粉、小麥粉等20%以上可無需另外添加玉米粉，也可以用5公斤以上多糖性復合菌種營養基代替），均勻混合后將物料含水量調節至60%左右，密封發酵7-15天后（夏短冬長，氣溫低于15度時建議在室內進行保溫發酵）,發酵料有濃郁甜酒香味即可使用。脫霉后的飼料按照飼料比例的30%左右與飼養動物的全價飼料混合后飼喂，不可以單獨飼喂。

→用99多功能飼料發酵劑對霉變的飼料及飼料原料脫霉技術

五、對棉粕、菜粕、菜粕、棕櫚粕、花生枯、茶枯的脫毒與生成小肽

本品500克先放入10公斤溫水中激活2小時以上，1噸待發酵原料，玉米粉100公斤（也可以用3公斤以上多糖性復合菌種營養基代替）、食鹽2公斤。含水量調節到55%左右密封發酵一周以上。本產品不僅能夠快速去除棉粕、菜粕、菜粕、棕櫚粕等其中的抗營養因子（俗稱其中的毒素），形成生物蛋白飼料代替豆粕提高消化吸收率，還能夠在發酵過程中生成大量對動物有益的的小肽。

→菌酶協同發酵豆粕工藝的優化

→發酵豆粕營養價值及其在豬生產中的應用

→利用發酵豆粕代替魚粉對斷奶仔豬產能和腸道細菌的影響試驗。

六、中草藥及中藥渣發酵方法

1.固態中草藥發酵技術：將100公斤中草藥粉碎，越細越好放入80公斤的35℃左右的溫水中，加入玉米粉（也可以用750克以上多糖性復合菌種營養基代替）與豆粕各10公斤、本品1包先放入10公斤溫水中激活2小時以上、食鹽200克，放入塑料容器內壓實密封發酵7天以上后使用，密封可以保存一年以上，按照飼料比例的1%以上添加到飼料或飲水中使用。

2.液態中草藥發酵技術（即發酵成為中草藥活菌水的方法，操作視頻見下面）：1.5-2公斤中草藥（如“御瘟湯”）+1包本品先放入10公斤溫水中激活2小時以上+10公斤全價飼料（可以用750克以上多糖性復合菌種營養基或2公斤以上紅糖代替）+100公斤清水混合在非金屬容器中簡單密封發酵72小時以上后使用（在半個月內使用完效果更好，且要持續密封保存，否則時間一長可能變質不能使用）。按照5%-10%的比例添加到動物飼料中飼喂，或2%-5%的比例添加的動物飲水中飼喂。

3.中藥渣發酵：中藥渣1立方，本品1包先放入10公斤溫水中激活2小時以上、玉米粉100公斤（也可以用3公斤以上多糖性復合菌種營養基代替）、豆粕50公斤（花生粕、菜粕、茶粕等均可），食鹽3公斤，混合含水量調節在55%-60%左右，裝入大容器或薄膜袋中壓實密封發酵，一般一周左右有濃郁的甜酒香味即可使用，密封可以保存一年以上。發酵后的中藥渣按5%以上的比例添加到飼料中。

七、制作輕度全量發酵飼料及水料上的運用

本品500克先放入10公斤溫水中激活2小時以上、全價飼料1000公斤、清水600-800公斤混合發酵6-24小時后飼喂，形成輕度全量發酵預消化模式；或者清水增加到1500公斤以上形成水料發酵24小時內飼喂，兩種模式能夠達到更好的消化吸收率。

八、制作優質的青貯飼料

將本品1包先放入20公斤溫水中激活24小時以上備用，制作青貯飼料時比較均勻地噴灑到3-5立方物料中，能夠加速發酵、提高質量和適口性，且不容易失敗還能夠更長時間保存。

【配料說明和注意事項】

1、將本品（粉劑與包裝內的稠狀物質）放入約20倍的溫水中化開2-24小時活化后再使用效果更好；在發酵物料時一定要壓實密封，環境溫度低于20℃建議適當保溫或延長發酵時間；制作液體菌劑和密封發酵飼料過程中會產生氣體注意放氣安全；密封好不開封的情況下發酵料可以保存1年以上不變質。密封效果不好會導致發酵料表面霉變，飼喂時要鏟除表面霉變的發酵料。

2、發酵料如果酸度過大，動物適口性差時可以在飼喂前混料時添加1%-2%小蘇打中和酸度，改善動物適口性，或者降低發酵飼料的使用量。

3、發酵料開封進行飼喂后，建議7天內使用完，每次取料后要注意繼續進行密封保存。

4、發酵料由于營養不全面，建議在飼喂混料時添加適當的能量飼料和蛋白飼料、預混料來調節營養配比，使動物達到更佳的飼喂效果和生長速度。

5、動物第一次飼喂發酵料必須遵循先少量飼喂然后逐步加量的原則，一般幼小階段動物最大添加量10%-20%，中等階段動物20%-30%，鄰近出欄階段30%-40%。在實際飼養中行適當的調整。                                             

6、第一次使用發酵飼料可能會出現零星或者短時間的腹瀉，這些都屬于正常的現象。可以通過減少發酵料和添加藥物進行調整。連續使用發酵料一周后會發現動物的消化率大大的提高，糞便變松軟而且量變少，欄舍的氨臭味大大的減低。

7、飼喂本產品及發酵飼料不影響正常的動物免疫，動物發生疾病使用大劑量抗生素藥物時，繼續使用本品和發酵飼料無副作用，母畜與孕畜也可以使用。 

【包裝規格】500克/包（菌種+酶制劑300克，多糖性復合菌種營養基200克，市場售價約25元/包），30包/箱。規模養殖場可以提供25公斤裝或者進行產品定制。

【質保與儲存】12個月，常溫下于通風、陰涼、干燥處存放。

【生產企業】南寧微瑞生物科技有限公司

廠家地址：廣西南寧市高新區科園大道58號

聯系電話：400-030-9099，0771-2204816、3800156

微信公眾：gxzn-99，網址：www.zn99.com，www.glendi.net

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廣西助農畜牧科技有限公司有7個專業現代生態養殖技術實戰型團隊，為全國養殖場進行非洲豬瘟防控技術、現代循環生態養殖場的規劃、設計、建設、整改等服務；養殖場環保問題低成本解決方案（養殖場惡臭、氨氣，蒼蠅、污水、糞污資源化、病死動物無害化處理）與專業配套產品。幫助政府部門完成現代生態養殖、糞污資源化、病死動物無害化處理、糧改飼、秸稈綜合利用、牧草產業等達標工作、培訓工作（免費且有專業資料等），針對您當地制定專業方案，做出示范樣板后確定效果再進行推廣。

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廣西助農公司有著20余年的生物發酵飼料經驗，能夠針對你的養殖場做出最適合的模式，我們的發酵技術不僅設施投資簡單（僅需塑料袋或塑料容器等即可），且發酵成功率很高。最關鍵是制作出來的發酵飼料品質比一般更好（得益于先進的酶菌結合發酵劑與經驗總結），能夠為你生產出低成本、養殖環保無抗優質的動物產品出來，大量成功案例可以驗證。提供上門服務（快速解決家禽養殖上的疾病、環保、肉品質等問題）。

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相關鏈接——農業農村部鼓勵企業和研發機構加快生物飼料、酶制劑、益生菌、植物提取物等抗生素替代產品開發，推動全行業抗生素減量替代，確保畜禽產品質量安全