1.1 發(fā)酵飼料

生物發(fā)酵飼料由播恩集團(tuán)依托“農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物飼料國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”自主研發(fā)，以玉米、豆粕等為主要原料，采用自制乳酸桿菌、酵母菌、丁酸梭菌等優(yōu)良菌株復(fù)合發(fā)酵而成。其他發(fā)酵飼料為市面上相似的發(fā)酵飼料（原料、菌種種類基本相同，菌種來(lái)源和工藝不同）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)挑選144頭40日齡、平均體重為8.5kg（杜×長(zhǎng)×大）三元雜健康仔豬，試驗(yàn)期45d。試驗(yàn)仔豬將按公母各半，體重相近原則，隨機(jī)分成3組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12頭仔豬。對(duì)照組飼喂常規(guī)保育料為基礎(chǔ)飼糧（含土霉素鈣），試驗(yàn)1、2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加4%生物發(fā)酵飼料、4%其他發(fā)酵飼料。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在播恩集團(tuán)懷集養(yǎng)殖基地進(jìn)行。仔豬保育舍日常溫度控制在23~26℃。試驗(yàn)豬只分欄、封閉式飼養(yǎng)，水泥地面，干燥清潔，負(fù)壓通風(fēng)，顆粒料飼喂，自由飲水。每天觀察豬只健康狀況，其他按照常規(guī)飼養(yǎng)操作規(guī)程進(jìn)行。每天分別于07:00-9:00和16:00-18:00投料飼喂，保持料槽不斷料。每次喂料量不宜太多，防止料槽中飼料變質(zhì)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 日增重

試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，準(zhǔn)確逐只稱重（不空腹，但開(kāi)始和結(jié)束稱重時(shí)間統(tǒng)一在早晨7：00-9：00時(shí)間段），計(jì)算平均日增重。

1.4.2 日采食量

以重復(fù)（欄）為單位，準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)投料量和剩余料量，計(jì)算每只試豬平均日采食量。以欄為單位，每天收集拋灑到食槽外面的飼料，準(zhǔn)確稱重，并記錄。

1.4.3 耗料增重比

根據(jù)日增重和日采食量計(jì)算耗料增重比。

1.4.4 腹瀉情況

每天仔細(xì)觀察記錄每欄豬糞便性狀（成型性、軟硬度），登記每欄豬中各種程度的腹瀉豬頭數(shù)，每頭豬以當(dāng)天腹瀉最嚴(yán)重為當(dāng)天結(jié)果。

計(jì)算公式：

腹瀉率＝試驗(yàn)期仔豬腹瀉頭次/（試驗(yàn)頭數(shù)×試驗(yàn)時(shí)間）×100%

1.4.5 血清和糞便收集

收集血清：試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早晨空腹，進(jìn)行前腔靜脈抽血，抽取5~10mL血液，用添加促凝劑的試管分裝靜置后，3000r/min離心15~20min，取上層血清冰箱-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>

采集糞便：試驗(yàn)結(jié)束后每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3頭健康仔豬，使用無(wú)菌棉簽伸到肛門內(nèi)挖取新鮮糞便各1g，置于4℃冰上，然后在無(wú)菌操作臺(tái)上檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌和乳酸菌數(shù)。

1.4.6 血液指標(biāo)檢測(cè)方法

在自動(dòng)生化分析儀（深圳雷杜生命科技CHEMRAY 240）上測(cè)定血液生化指標(biāo)（包括葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮等）；使用ELISA試劑盒在酶標(biāo)儀上測(cè)定免疫指標(biāo)IgA、IgG、IgM濃度，試劑盒采購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4.7 統(tǒng)計(jì)分析

生產(chǎn)性能以欄為重復(fù)單位，血液指標(biāo)、腸道微生物以豬只頭數(shù)為重復(fù)單位。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 9.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，以P＜0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。