1、材料與方法

1.1試驗材料

采集一頭牛牧場未發(fā)霉、品質(zhì)優(yōu)良的揉絲玉米秸稈。試驗所用的枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、假絲酵母菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、米曲霉菌和葡萄糖氧化酶(2000μ/g)均，活菌數(shù)1.0X108CFU/mL。

1.2試驗設計

試驗采用單因素完全隨機設計，設置未發(fā)酵玉米秸稈為對照組（CK），6個試驗組，分別為3個復合菌組，即T1組（枯草芽孢桿菌50%、植物乳桿菌25%、假絲酵母菌25%）、T2組（地衣芽孢桿菌50%、植物乳桿菌25%、假絲酵母菌25%）、T3組（枯草芽孢桿菌50%、米曲霉菌25%、假絲酵母菌25%），3個復合菌酶組，即TG1組(T1+0.5%葡萄糖氧化酶)、TG2組(T2+0.5%葡萄糖氧化酶)、TG3組(T3+0.5%葡萄糖氧化酶)，每組3個重復。將揉絲玉米秸稈切短至4~5cm，按試驗設計，干物質(zhì)基礎上將1kg玉米秸稈、0.5%尿素、2%硫酸錢、5%復合菌(菌液形式加入)、0.5葡萄糖氧化酶混合均勻，袋裝抽真空封口發(fā)酵，發(fā)酵60d后開包分別取對照組和試驗組樣品，分析發(fā)酵玉米秸稈的常規(guī)營養(yǎng)成分、霉菌毒素、瘤胃發(fā)酵參數(shù)和體外消化率。

1.3測定指標與方法

1.3.1常規(guī)營養(yǎng)成分

采集對照組樣品和試驗組發(fā)酵好的玉米秸稈，根據(jù)試驗需要量，稱取樣品并檢測發(fā)酵后秸稈常規(guī)營養(yǎng)成分含量。采用烘干法測定干物質(zhì)（DM）；凱氏定氮法測定粗蛋白(CP)；濾袋法測定粗纖維(CF)；灼燒法測定粗灰分(Ash)；洗滌纖維分析法測定中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維（ADF）；高錳酸鉀法測定鈣(Ca)；分光光度法測定磷(P)。

1.3.2霉菌毒素

稱取適量對照組玉米秸稈和發(fā)酵后的樣品，根據(jù)高效液相法操作步驟進行檢測，霉菌毒素主要測定黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等。

1.3.3瘤胃發(fā)酵參數(shù)

選擇3頭年齡、生理狀態(tài)、生產(chǎn)性能相近，發(fā)育正常，體況良好的荷斯坦奶牛，晨飼前使用瘤胃液采集管經(jīng)口腔收集新鮮瘤胃液，迅速裝入充滿二氧化碳的塑料瓶中，保溫（39℃）快速帶回實驗室并用4層紗布過濾。參考方法配制緩沖液，準確稱取1g樣品，加入50mL瘤胃液和150mL緩沖液，分裝完成后置于震蕩培養(yǎng)箱中39℃培養(yǎng)，分別記錄9個時間點(3、6、9、12、24、18、36、48、72h)的產(chǎn)氣量，體外培養(yǎng)72h后終止。培養(yǎng)液pH用pH計測定;氨態(tài)氮(NH3-N)采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定；微生物蛋白(MCP采用考馬斯亮藍色法測定；揮發(fā)性脂肪酸(VFA)采用氣相色譜法測定。

1.3.4體外消化率

干物質(zhì)體外消化率(IVDMD)、粗蛋白體外消化率(IVCPD)、中性洗滌劑纖維體外消化率(IVNDFD)和酸性洗滌劑纖維體外消化率(IVADFD)通過活體外兩階段法測定。將纖維袋在65℃烘1h，未加樣品的纖維袋做空白，稱量2g樣品，封口并放入培養(yǎng)瓶中，迅速將每個培養(yǎng)瓶中按照1:3的比例加入提前預熱至39℃的瘤胃液和緩沖液，充分混合并充入CO2，蓋上橡膠塞并密封。將培養(yǎng)瓶置于體外模擬培養(yǎng)箱中39℃恒溫培養(yǎng)48h，培養(yǎng)完成后棄培養(yǎng)液，加入2L酸性胃蛋白酶溶液(1L0.lmol/LHCL中加入2g胃蛋白酶)繼續(xù)培養(yǎng)48h，培養(yǎng)結束后，用冷水洗滌終止反應。在105℃烘箱中烘至恒重，準確稱重測定DM含量，采用凱氏定氮法測CP含量，范氏洗滌纖維分析法測定NDF、ADF含量，IVDMD、IVCPD、IVNDFD及IVADFD計算公式如下:

IVDMD=樣品DM含量-未消化DM含量)/樣品DM含量×100%

IVCPD=(樣品CP含量-未消化CP含量)/樣品CP含量×100%

IVNDFD=(樣品NDF含量-未消化NDF含量)/樣品NDF含量×100%

IVADFD=(樣品ADF含量-未消化ADF含量)/樣品ADF含量×100%

1.4統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel2010軟件進行初步統(tǒng)計，再用SAS8.1軟件進行單因素完全隨機設計的方差分析，結果采用平均值士標準差表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2、試驗結果

2.1菌酶協(xié)同處理玉米秸稈的常規(guī)營養(yǎng)成分

由表1可知，TG1組和TG2組DM和CP含量高于對照組（P<0.01）；復合菌酶組Ca含量高于復合菌組(P<0.01)；T1組P和Ash含量高于其他組(P<0.01)；T2組、T3組和復合菌酶組NDF含量低于對照組(P<0.01)，TG2組最低；6個試驗組CF和ADF含量低于對照組(P<0.01)。

注:同行數(shù)據(jù)肩標小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，大寫字母不同表示差異極顯著(P

2.2菌酶協(xié)同處理玉米秸稈的霉菌毒素

由表2可知，TG2組和T2組黃曲霉毒素B1含量高于其他組(P<0.01)，但均在安全范圍內(nèi)（黃曲霉B1≤30μg/kg，玉米赤酶烯酮≤500μg/kg，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇≤1000μg/kg）；復合菌酶組玉米赤霉烯酮含量高于復合菌組(P<0.01)；T1組脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量低于除TG3組的其他組(P<0.01)。

2.3瘤胃發(fā)酵參數(shù)

由表3可知，試驗組培養(yǎng)液pH低于對照組(P<0.01)，試驗組間差異不顯著，但TG2組最低；復合菌酶組6h和12h產(chǎn)氣量高于對照組(P<0.05），TG2組最高；TG2組36h,48h和72h產(chǎn)氣量高于T1組、T3組和對照組(P<0.05），但與TGl組、TG3組和T2組之間差異不顯著；T2組6、12、36、48h和72h產(chǎn)氣量與復合菌酶組差異不顯著；T1組、T2組和復合菌酶組NH3-N含量高于對照組(P<0.01)；復合菌酶組MCP含量高于對照組(P<0.01)，復合菌組MCP含量與對照組差異不顯著。

由表4可知，復合菌酶組和復合菌組乙酸、丙酸、丁酸含量均高于對照組(P>0.05)，TG1組和TG2組戊酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量高于對照組(P<0.05)。

2.4體外消化率由表5可知，復合菌酶組IVDMD高于復合菌組和對照組(P<0.01),TG2組最高;復合菌酶組IVCPD高于T1組、T3組和對照組(P<0.01)，3個復合菌組間IVCPD差異不顯著；TG2組IVNDFD高于其他組(P<0.01)；各處理組IVADFD均高于對照組(P<0.01)，但試驗組間差異不顯著。

3、討論

3.1菌酶協(xié)同處理玉米秸稈對常規(guī)營養(yǎng)成分含量的影響

3.1.1ADF和NDF含量

我國玉米秸稈資源豐富，但其粗纖維含量高、粗蛋白含量低、適口性差，嚴重影響反芻動物采食量和消化吸收效率，NDF和ADF含量可反映飼料品質(zhì)，NDF影響反芻動物的瘤胃充盈度和采食量，NDF含量與飼料能量呈反比，ADF含量與有機物消化率成反比。玉米秸稈的揉絲微生物發(fā)酵技術逐步興起，經(jīng)秸稈揉搓機操作，縱向拉絲揉搓，微生物發(fā)酵后可制成適口性好、營養(yǎng)價值高的飼料，本研究中，T2組、T3和復合菌酶組NDF含量低于對照組，6個試驗組ADF含量低于對照組。說明菌酶制劑協(xié)同處理玉米秸稈可以降低NDF和ADF含量，可能由于早期地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、假絲酵母菌和GOD協(xié)同作用改變玉米秸稈中纖維結構，提高乳酸含量，進而軟化秸稈木質(zhì)纖維，促進纖維素的釋放和降解。采用菌種和酶制劑協(xié)同發(fā)酵玉米秸稈，可降解纖維素、半纖維素等，促進發(fā)酵，提高飼料利用率，研究表明，采用酶菌復合制劑處理玉米秸稈其NDF、ADF含量顯著降低。

3.1.2DM和CP含量

DM含量反映飼料的營養(yǎng)價值和品質(zhì)，可用于衡量制備粗飼料的過程中養(yǎng)分的流失與保留。本研究中，TG1組和TG2組DM和CP含量顯著高于對照組，說明地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、假絲酵母菌與GOD協(xié)同發(fā)酵玉米秸稈，提高DM和CP含量的效果最好，可能是由于地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌和GOD的協(xié)同效果，促進假絲酵母菌分泌胞外酶，促進秸稈中木質(zhì)纖維素降解，充分利用發(fā)酵底物，合成自身蛋白質(zhì)。研究表明采用黃孢原毛平革菌和復合酶制劑協(xié)同處理玉米秸稈，其DM和CP含量增加。采用不同菌種與酶制劑混合處理水稻秸稈，結果顯示試驗組DM和CP含量高于對照組。報道，添加生物制劑處理玉米秸稈，CP含量降低與本試驗結果不同，可能是因為采用的菌和酶制劑種類和發(fā)酵時間不同，發(fā)酵過程中微生物種類存在差異，對營養(yǎng)物質(zhì)的利用方式不同，進而引起DM含量差異。

3.2菌酶協(xié)同處理玉米秸稈對產(chǎn)氣量的影響

秸稈中可發(fā)酵性碳水化合物能被發(fā)酵培養(yǎng)液中的瘤胃微生物利用，產(chǎn)生較多的揮發(fā)性脂肪酸、CH4和CO2等氣體。體外產(chǎn)氣法可快速評估飼料的營養(yǎng)價值，反映瘤胃中微生物的生物活性、飼料降解效率和發(fā)酵程度。產(chǎn)氣量與可發(fā)酵性碳水化合物含量呈正比，飼料的營養(yǎng)價值越高，微生物活性越強，產(chǎn)氣量也就越高。本試驗中，TG2組48h產(chǎn)氣量高于復合菌組和對照組，說明發(fā)酵過程中地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌協(xié)同效果較好，添加菌種可能與原有菌群相互促進，且在GOD作用下充分利用發(fā)酵底物，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，進而提高酶活性和發(fā)酵效果，與研究結論一致。

3.3菌酶協(xié)同處理玉米秸稈對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

3.3.1pH

優(yōu)質(zhì)青貯飼料應具有較高的乳酸含量和較低的pH和丁酸水平。pH可反映發(fā)酵過程中酸堿平衡關系，由可吸收的營養(yǎng)成分決定。本研究中，試驗組培養(yǎng)液pH顯著低于對照組，且TG2組最低，pH降低可能因為加入地衣芽孢桿菌和植物乳桿菌協(xié)同GOD促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用，產(chǎn)生乳酸及其他有機酸，且在體外試驗中沒有瘤胃壁不能吸收，造成揮發(fā)性脂肪酸積累，引起pH降低，這與研究結果相同。

3.3.2NH3-N和MCP含量

NH3-N是瘤胃中飼料含氮物質(zhì)分解的最終產(chǎn)物，可促進微生物合成蛋白質(zhì)，反映瘤胃內(nèi)微生物氮的供應狀況，瘤胃內(nèi)微生物所需最佳濃度為6.30~27.50mg/dL。瘤胃內(nèi)NH3-N濃度過低，限制纖維素的分解和微生物合成蛋白質(zhì)，過高經(jīng)機體代謝排出體外，造成浪費。MCP是反芻動物最主要的氮源，在充足的情況下，能量是MCP合成的第一限制性因素，主要取決于可發(fā)酵碳水化合物的發(fā)酵速率，與微生物生長效率成正比。本研究中，試驗組NH3-N濃度是21.20~24.93mg/dL，均在最適范圍內(nèi)，T1組、T2組和復合菌酶組NH3-N含量高于對照組，復合菌酶組MCP含量高于對照組，說明復合菌與GOD處理玉米秸稈利于提高MCP和NH3-N含量，可能是發(fā)酵過程中GOD促進有益菌生長，提高消化酶活性，協(xié)同植物乳桿菌促進秸稈中纖維素分解，釋放出的營養(yǎng)物質(zhì)含量增加，枯草芽孢桿菌促進蛋白利用，地衣芽孢桿菌促進腸道吸收，地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌和GOD相互促進，進而MCP含量升高。服道菌酶協(xié)同處理玉米秸稈，NH3-N含量降低，與本試驗結果相反，可能是由于發(fā)酵初期，TG2組復合菌協(xié)同GOD分解蛋白質(zhì)效果較好，使NH3-N含量升高。

3.3.3VFA

VFA是反芻動物瘤胃中飼料的碳水化合物和蛋白質(zhì)的最終分解產(chǎn)物，可為畜禽機體提供70%~80%的能量，可反映瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性和瘤胃發(fā)酵狀況。VFA的主要組分是乙酸、丙酸和丁酸，乙酸可促進提高畜禽體脂率，丙酸可促進機體轉(zhuǎn)化和貯存葡萄糖，丁酸能為機體組織提供所需能量。本研究中，試驗組總VFA含量高于對照組，表明復合菌及其與GOD協(xié)同處理玉米秸稈，均可促進營養(yǎng)物質(zhì)的利用，進而提高VFA產(chǎn)量，且菌酶協(xié)同效果更佳。VFA含量升高可能是因為發(fā)酵過程中菌酶協(xié)同且分泌大量蛋白酶、消化酶等，充分利用秸稈中的營養(yǎng)物質(zhì)，這與研究結果一致。

3.4體外消化率

體外消化率可反映養(yǎng)分被消化利用的難易程度與微生物對飼料的降解效果，影響干物質(zhì)采食量和生產(chǎn)性能。本研究中，TG2組IVDMD、IVCPD、IVNDFD和IVADFD高于其他組，可能是GOD促進地衣芽孢桿菌和植物乳桿菌合成豐富的消化酶，軟化秸稈木質(zhì)纖維，打破纖維結構的束縛，破壞細胞壁結構，促進細胞內(nèi)容物的釋放，研究結果一致。

4、結論

本試驗結果顯示，地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、假絲酵母菌與GOD組DM、CP含量最高，NDF和ADF含量較低，各項霉菌毒素含量均在安全范圍內(nèi)；體外產(chǎn)氣培養(yǎng)液pH最低，6、12、36、48h和72h產(chǎn)氣量、VFA及MCP含量顯著提高；營養(yǎng)物質(zhì)體外消化率有所改善。因此，TG2組菌酶協(xié)同作用效果最好，以期為后續(xù)生產(chǎn)提供理論基礎。

本產(chǎn)品是一種以高濃度乳酸菌和酵母菌等組合酶菌結合的復合專業(yè)飼料發(fā)酵劑產(chǎn)品，可以發(fā)酵我們常見的大部分飼料原料、農(nóng)家飼料、農(nóng)產(chǎn)品與食品加工下腳料，制作活性EM菌液與制作青貯飼料，具有發(fā)酵、除霉、降解纖維、提高發(fā)酵飼料營養(yǎng)與適口性且能夠長時間保存等功能，具有操作簡單成功率高、成本低廉等特點。

活力99增香增甜飼料發(fā)酵劑，高濃度乳酸菌、酵母菌專業(yè)酶菌結合飼料發(fā)酵劑，多功能飼料發(fā)酵劑，青貯飼料發(fā)酵劑_生態(tài)養(yǎng)殖環(huán)境治理_生態(tài)產(chǎn)品_高效生態(tài)養(yǎng)殖技術網(wǎng) (fjc001.com)

本產(chǎn)品符合飼料衛(wèi)生標準

【生產(chǎn)許可證號】桂飼添（2021）H01001

【產(chǎn)品執(zhí)行標準】Q/NNWR 02-2021（飼用復合微生物添加劑Ⅰ）

【適用對象】畜禽、水產(chǎn)、環(huán)保

【原料組成】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等，復合酶制劑與載體等。

【產(chǎn)品成分分析保證值】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等合計≥100億cfu/g，水分＜9.0%。

凈重：200 克/袋。

本產(chǎn)品是在活力99生酵劑的基礎上的升級產(chǎn)品，升級了増香增甜等功能效果。

鑒別本產(chǎn)品真假與效果的簡單方法：500毫升左右的礦泉水瓶子中放入約50克大米+300毫升35℃左右的溫水，加入本產(chǎn)品5克，幾個小時就會產(chǎn)生大量香醇氣體，72小時內(nèi)大米基本溶解為乳狀。做試驗時請切記要注意礦泉水瓶炸開的安全。

產(chǎn)品使用說明書

（一）制作加強型活性EM菌液

在非金屬容器中將本品1包（200克）與1公斤紅糖（也可以用5公斤大米或玉米等含淀粉類的飼料代替）放入約50公斤溫水中，簡單密封48小時后就變成了加強型活性EM菌液（每毫升活菌在100億左右）。其使用方法如下：

1.在畜禽上的使用方法：根據(jù)不同動物與飼養(yǎng)周期按其飼料重量的0.1%-0.5%拌入飼料或飲水中后飼喂或飲用。

2.養(yǎng)殖場緊急除臭生物消毒：取加強型活性EM菌液兌水30倍清水，對產(chǎn)生臭味與異味的養(yǎng)殖區(qū)域、糞污水道、糞堆、污水池進行噴灑，以噴灑表面濕潤為準，接待參觀前1-3小時補噴一次效果更好。

3.制作青貯飼料：每噸青貯飼料中加入10公斤加強型活性EM菌液，簡單噴灑在料上壓實密封發(fā)酵15天以上。

4.養(yǎng)殖水產(chǎn)上的使用：每畝使用5公斤加強型活性EM菌液進行噴灑，晴天進行噴灑后注意增氧。

（二）制作各種發(fā)酵飼料

本品能夠發(fā)酵木薯渣、豆渣、米粉面條加工下腳料、剩菜剩飯、米糠、統(tǒng)糠、菌糠、酒糟、果渣果皮、青黃秸稈、牧草、紅薯藤、輕度霉變飼料等各種廉價飼料（下腳料）、各種飼料原料與全價飼料等，每500公斤待發(fā)酵原料加入本品1-2包（或50公斤上述加強型活性EM菌液）、20公斤以上的玉米粉或其它含淀粉類的飼料原料、1公斤食鹽（含有足夠食鹽的原料就不添加），含水量調(diào)節(jié)到約60%，壓實密封發(fā)酵2-7天左右有濃郁香味時即可使用。發(fā)酵后飼料的適口性、營養(yǎng)、消化率較未發(fā)酵前有明顯提升。發(fā)酵后的飼料根據(jù)不同動物與不同飼養(yǎng)周期按照10%-50%與該動物其它全價飼料混合后飼喂（先少量飼喂適應后逐漸增加的原則），不可以單獨飼喂或全部飼喂發(fā)酵飼料。

（三）發(fā)酵水產(chǎn)動物飼料成高濃度乳酸菌保健品

①部分發(fā)酵飼料運用：100公斤水產(chǎn)飼料、50公斤清水、本品1包密封發(fā)酵7天以上變成高濃度乳酸菌發(fā)酵飼料，以10%比例與水產(chǎn)動物飼料混合后飼喂，或者發(fā)酵飼料單獨飼喂；②全部發(fā)酵飼料飼喂：也叫輕度發(fā)酵飼料技術，300公斤水產(chǎn)全價飼料、本品1包、水120公斤混合發(fā)酵24小時全部飼喂，這種預消化結合大量乳酸菌飼喂能夠顯著改善水產(chǎn)動物腸道健康、水質(zhì)改善等優(yōu)點。

（四）發(fā)酵部分禽糞做飼料

發(fā)酵雞糞（鴿子糞、兔糞等）作豬、魚等動物飼料，本品2包、100公斤玉米粉其它含淀粉類的飼料原料、500公斤雞糞，加入適量麥麩或米糠調(diào)節(jié)含水量約為55%-60%，覆蓋薄膜進行發(fā)酵，一周左右有濃郁香味時即可使用，可代替飼料20%左右，用于喂豬或魚類等。

（五）發(fā)酵菜粕、棉粕、花生餅、茶枯脫毒

原料1000公斤，玉米面其它含淀粉類的飼料原料100公斤，食鹽2公斤，含水量調(diào)節(jié)到55%左右，本品2包，簡單地攪拌均勻，密封發(fā)酵15天以上成為高濃度乳酸菌小肽豐富的生物蛋白飼料，喂前攤開透氣10分鐘再作為蛋白質(zhì)原料使用于自配飼料中，可以等蛋白代替豆粕和玉米粉如：17%的發(fā)酵菜粕=10%的豆粕+7%的玉米粉，降低成本提高使用效果。

（六）中草藥及中藥渣發(fā)酵方法

1.固態(tài)中草藥發(fā)酵技術：將50公斤中草藥粉碎，越細越好放入40公斤的35℃左右的溫水中，加入玉米粉與豆粕各5公斤、本品1-2包、食鹽100克，放入塑料容器內(nèi)壓實密封發(fā)酵7天以上后使用，密封可以保存一年以上，按照飼料比例的1%以上添加到飼料或飲水中使用。

2.液態(tài)中草藥發(fā)酵技術：1公斤中草藥+1包本品+1公斤紅糖+20公斤清水混合在非金屬容器中簡單密封發(fā)酵72小時以上后使用。每噸飼料中添加10公斤或每噸飲水中添加5公斤。

（七）直接拌料或飲水、制粒飼喂、制作水料

根據(jù)不同動物在每噸飼料添加本品2-4包，直接拌料或每包加入1.5-2噸飲水中使用；本產(chǎn)品采用微生物多層包被技術，在每噸3包本品混合飼料中直接制粒，90℃下5分鐘不會影響效果；動物采用水料水料（粥料）的制作：本品1-2包、500公斤全價飼料、1000公斤清水混合后發(fā)酵6小時以上后飼喂（預消化的輕度發(fā)酵模式），24小時內(nèi)飼喂完。

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