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導(dǎo)   語

微生物發(fā)酵飼料富含小肽、益生菌、有機酸、酶和細(xì)菌素等代謝產(chǎn)物，可發(fā)揮提高飼料消化率、改善腸道健康、促進(jìn)宿主免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)等作用。現(xiàn)代養(yǎng)殖中，仔豬實行早期隔離斷奶并采食高蛋白日糧等導(dǎo)致其腸絨毛受損、緊密連接蛋白降低、菌群紊亂、病毒性腹瀉產(chǎn)生、抗病力下降等。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加復(fù)合酸化劑能顯著提高空腸絨毛高度并降低隱窩深度，提高日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率；復(fù)合酶制劑能顯著提高日糧能量、蛋白質(zhì)和有機干物質(zhì)的消化率；復(fù)合微生態(tài)制劑能改善血液抗氧化指標(biāo)、降低腸道內(nèi)容物pH、改善腸道菌群平衡，降低腹瀉率。總之，微生物發(fā)酵料因富含各種動物所需營養(yǎng)素和代謝產(chǎn)物，能針對仔豬腸道特征，促進(jìn)腸道消化吸收功能，維護(hù)腸道健康。本試驗旨在研究微生物發(fā)酵料對仔豬生產(chǎn)養(yǎng)殖和替代抗生素的應(yīng)用效果，為發(fā)酵飼料的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

微生物發(fā)酵料為某公司依托“農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物飼料國家重點實驗室”自主研發(fā)，并提供。優(yōu)選芽孢桿菌、酵母菌、乳酸桿菌和丁酸梭菌4種菌，以玉米、豆粕和黃酒糟等為底物，采用二次梯度發(fā)酵工藝進(jìn)行生產(chǎn)，發(fā)酵后活菌數(shù)≥2．66x108CFU／g，粗蛋白質(zhì)為16．51％、酸溶蛋白(占粗蛋白質(zhì)含量)≥18％、氨基態(tài)氮(占粗蛋白質(zhì)含量)為3．63％。試驗仔豬來自吳川市某農(nóng)牧有限公司，試驗地點為某公司養(yǎng)殖試驗基地。

試驗結(jié)束后稱重，每個重復(fù)取3頭豬前腔靜脈采血5 mL左右，室溫下靜止2 h，4℃冰箱放置過夜，4 500 r／min離心10 min，分離血清，-20℃保存待測。使用血紅蛋白儀現(xiàn)場采集測定豬只耳緣靜脈中血紅蛋白(HB)含量；使用深圳雷杜生命科技CHEMRAY 240全自動生化儀測定葡萄糖(GLU)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(BUN)含量；采用Elisa方法測定總抗氧化物酶(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，所用試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1．3．4    糞便菌群指標(biāo)

1．3．4．1    樣品采集

試驗結(jié)束后每個重復(fù)隨機選取3頭健康仔豬，使用無菌棉簽伸到肛門內(nèi)挖取新鮮糞便各1g，置于4℃冰上，然后在無菌操作臺上檢測菌落總數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌和乳酸菌數(shù)。

1．3．4．2    培養(yǎng)基

菌落總數(shù)測定使用平板菌落計數(shù)法，瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨5．0 g，酵母浸粉2．5 g，葡萄糖1．0 g，瓊脂15 g，pH為(7．2 ±0．1)，用去離子水定容至1．0 L；大腸桿菌顯色培養(yǎng)基：蛋白胨10．0 g，酵母膏粉3．0 g，氯化鈉5．0 g，瓊脂12．0 g，十二烷基硫酸鈉0．1 g，混合色素2．7 g，pH為(7．0 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基：蛋白胨19．6 g，酵母膏粉3 g，氯化鈉5 g，膽鹽1．5 g，瓊脂12 g，混合色素6．4 g，pH(7．0 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L；乳酸桿菌使用LBS培養(yǎng)基：酵母浸粉5．0 g，胰酪蛋白胨10．0 g，磷酸二氫鉀6．0 g，硫酸亞鐵0．034 g，硫酸鎂0．575 g，葡萄糖20．0 g，乙酸鈉25．0 g，檸檬酸銨2．0 g，硫酸錳0．12 g，瓊脂15．0 g，pH(5．5 ±0．2)，用去離子水定容至1．0 L。

1．3．4．3測定方法與步驟

在超凈工作臺分別迅速取糞便內(nèi)容物0．1 g，置于滅菌15 mL試管中，加入0．9％滅菌生理鹽水10 mL，在20℃恒溫震蕩箱l 50 r／min震蕩10 min，使樣品充分搖勻，此液為10-2稀釋液，然后吸取1．0 mL置于盛有9．0 mL 0．9％滅菌生理鹽水的滅菌試管中進(jìn)行10-3稀釋，再依次進(jìn)行到10-6稀釋。分別將10-4、10-5、10-6稀釋液100mL涂抹于各培養(yǎng)基上，37℃有氧培養(yǎng)18～24 h后進(jìn)行菌落計數(shù)。各稀釋濃度設(shè)3個重復(fù)。采用平板計數(shù)法進(jìn)行菌落計數(shù)，并換算成1g(CFU／g)菌液，即用每克糞樣含活菌數(shù)表示。

采用SPSS 22．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用獨立樣本t檢驗，結(jié)果以平均值 ±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0．05為差異顯著，P>0．05為差異不顯著。

由表2可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料能提高仔豬ADG和ADFI(P<0．05)，降低腹瀉率(P<0．05)。

由表3可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料能顯著提高仔豬血液中HB、GLU和GLB的含量(P<0．05)；對血清ALT、AST、TP、ALB、TC、TG和BUN無影響。

由表4可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料組能提高血清T-AOC和SOD活性(P<0．05)，降低MDA含量(P<0．05)。

由表5可知，與對照組相比，微生物發(fā)酵料組能降低仔豬糞便大腸桿菌數(shù)，提高糞便乳酸桿菌數(shù)(P<0．05)。對糞便總菌數(shù)和沙門氏菌數(shù)無影響。

3．1   微生物發(fā)酵料對仔豬生長性能和腹瀉率的影響

本試驗基礎(chǔ)飼糧含吉他霉素和土霉素鈣各50 g／t，吉他霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要用于治療革蘭氏陽性菌、支原體及鉤端螺旋體等感染；土霉素為四環(huán)素類抗生素，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、支原體、螺旋體、放線菌及某些原蟲均有效(中國藥典，2015)。目前能有效預(yù)防和治療革蘭氏陰性菌的藥物添加劑相對較少，本試驗微生物發(fā)酵料含芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌和丁酸梭菌的總量可達(dá)2× 108／g，發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸及其他有機酸，使pH降低至4．5，同時能降解植物抗?fàn)I養(yǎng)因子，產(chǎn)生小肽和游離氨基酸、消化酶、維生素及細(xì)菌素等，提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收效率。本研究結(jié)果表明，微生物發(fā)酵料能顯著提高仔豬ADFl和ADG，降低腹瀉率，而且達(dá)到了替代部分抗生素的作用，與絕大部分研究結(jié)果相符。推斷與發(fā)酵料能產(chǎn)生有機酸、細(xì)菌素等發(fā)揮抑菌作用有關(guān)。

3．2   微生物發(fā)酵料對仔豬血液指標(biāo)的影響

HB是紅細(xì)胞內(nèi)運輸氧的特殊蛋白質(zhì)，也是最重要的維持內(nèi)環(huán)境pH穩(wěn)定的緩沖物質(zhì)，幼年動物HB含量與抗病力密切相關(guān)。本試驗首次在仔豬上發(fā)現(xiàn)微生物發(fā)酵料能顯著提高血液中HB含量，與王偉光等發(fā)現(xiàn)益生菌能改善兒童營養(yǎng)性缺鐵性貧血結(jié)果一致，均能顯著提高血液中HB含量，可能是因為微生物發(fā)酵料含促進(jìn)HB生成的代謝產(chǎn)物，能引起HB合成速度大于代謝速度，從而提高仔豬HB含量，但具體作用機理有待進(jìn)一步研究。

血清GLU是動物供能的主要物質(zhì)，其主要是飼糧經(jīng)消化系統(tǒng)后的代謝產(chǎn)物，仔豬斷奶后早期1—7 d血清GLU降低，且肝臟糖酵解關(guān)鍵酶丙酮酸激酶活性及其基因相對表達(dá)均降低，但飼糧添加復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高仔豬血清GLU含量，同時也能提高血清TP和GLB含量。本試驗中，微生物發(fā)酵料能提高仔豬血清GLU和GLB含量，與報道結(jié)果一致，說明微生物發(fā)酵料能參與或影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進(jìn)動物免疫功能。血清中TC含量是衡量機體脂代謝的重要指標(biāo)，反映了機體脂代謝情況。本試驗中，微生物發(fā)酵料對血清TC、TG無影響，這與Czech等報道的日糧酵母菌降低血清TC和TG含量不符，推測與酵母類型及飼糧添加水平相關(guān)。

抗氧化系統(tǒng)是動物機體清除體內(nèi)多余活性氧，保護(hù)自身免受氧化損傷的重要體系，包括非酶類和酶類抗氧化劑。動物機體在生化反應(yīng)過程中會產(chǎn)生一系列的活性氧，這些活性氧對細(xì)胞中的大分子物質(zhì)例如蛋白質(zhì)、脂類、DNA等造成損害，且能使脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生丙二醛等有害物質(zhì)引起機體損傷。而動物機體抗氧化系統(tǒng)包含各種抗氧化酶如SOD、GPX等和非酶物質(zhì)如維生素E、維生素A和谷胱甘肽等。本試驗表明，微生物發(fā)酵料能提高機體T-AOC能力、SOD活性，降低MDA含量，推測因其含各種豐富的有益代謝產(chǎn)物，如維生素、消化酶等均能提高機體自身抗氧化能力，與李濤、王娟娟等試驗結(jié)果一致。

3．3   微生物發(fā)酵料對仔豬糞便菌群的影響

糞便中細(xì)菌菌群數(shù)量可直接反映動物胃腸道微生物的內(nèi)環(huán)境變化。研究表明，腹瀉仔豬因為有害菌群增多抑制了有益菌群生長從而出現(xiàn)腹瀉,健康仔豬腸道內(nèi)有益優(yōu)勢菌群為乳桿菌>擬桿菌>雙歧桿菌，腹瀉仔豬腸道內(nèi)有害優(yōu)勢菌群為大腸桿菌>沙門氏菌。本研究所用微生物發(fā)酵料能顯著降低仔豬糞便大腸桿菌數(shù)，提高乳酸桿菌數(shù)，與其他學(xué)者所做研究報道一致，同時也有降低糞便沙門氏菌的趨勢。

飼糧添加4％的微生物發(fā)酵料替換配方中4％玉米，同時取消飼糧中50 g／t土霉素鈣藥物添加劑，可以提高仔豬生長性能，增強仔豬抗氧化能力和血清健康水平，同時改善腸道健康。

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