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不同添加劑及貯藏溫度對發(fā)酵全混合日糧品質(zhì)和真菌數(shù)量的影響

2020-08-17 17:11:59      點擊:

摘要:本試驗旨在探究添加劑及貯藏溫度對發(fā)酵全混合日糧(Fermented Total Mixed Rations,FTMR)的影響,為FTMR在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用提供科學依據(jù)。試驗設(shè)置了布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri,LB)、沒食子酸(Gallicacid,GA)、果膠酶(Pectinase,PE),共3個添加劑和對照組(CK),4個不同的貯藏溫度(10℃、20℃、30℃和40℃),發(fā)酵7d后取樣。結(jié)果表明,隨著貯藏溫度的升高,各處理的pH值均顯著降低,CK、LB和GA處理組的pH值于30℃達到最低,PE處理組于40℃達到最低(P<0.05);隨著貯藏溫度的升高,各處理組中乙酸和丙酸的含量均顯著升高(P<0.05),其中乙酸的含量于30℃時達到最高,丙酸的含量于40℃時達到最高;添加PE后,FTMR的pH值在10℃、30℃和40℃下均顯著低于其他處理組(P<0.05)。綜上,貯藏溫度為30℃和40℃時FTMR的發(fā)酵品質(zhì)較好,當貯藏溫度為10℃、30℃和40℃時添加果膠酶可以提高FTMR的發(fā)酵品質(zhì)。

全混合日糧(Total Mixed Rations,TMR)是依據(jù)不同生長發(fā)育階段和生產(chǎn)階段反芻動物的營養(yǎng)需等日糧成分用特制的攪拌機混合成均勻一致、營養(yǎng)平衡的日糧,其在牛羊的飼養(yǎng)過程中使用比較廣泛。但TMR的制作也需要大量專業(yè)的價格高昂的機器設(shè)備,需要較多的固定資本投入。為了解決TMR的上述缺點,日本率先開發(fā)了發(fā)酵全混合日糧(Fermented Total Mixed Rations,FTMR)技術(shù)。FTMR是普通青貯發(fā)酵技術(shù)和全混合日糧技術(shù)的結(jié)合,其具有飼料利用率及營養(yǎng)價值較高、可長距離運輸實現(xiàn)商品化流通等特點,使得缺乏相關(guān)機器設(shè)備的生產(chǎn)單位也可以獲得優(yōu)質(zhì)的日糧。但FTMR作為青貯飼料的一種,其品質(zhì)與多種因素有關(guān)。有研究表明,在制作青貯飼料時合理地使用添加劑不但可以提高青貯效果,而且還可以獲得品質(zhì)優(yōu)異的青貯飼料。乳酸菌是青貯制作過程中的首選添加劑,其可以有效降低青貯飼料的pH值,抑制不良微生物的代謝生長,減少干物質(zhì)和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的損失。布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)作為異型發(fā)酵乳酸菌同樣可以提高青貯飼料的青貯品質(zhì),而且還會增強青貯飼料的有氧穩(wěn)定性。一般認為,青貯中主要存在的真菌是霉菌和酵母菌,其中霉菌可以利用糖和乳酸,分解纖維素等細胞壁成分,是造成青貯飼料腐敗變壞的主要微生物。而沒食子酸(Gallic acid)是一種天然有機酚酸,可以抑制腐敗菌和食源性致病菌。He等認為沒食子酸是綠色添加劑,其可以提高青貯的發(fā)酵品質(zhì),有利于蛋白質(zhì)的保存。果膠(Pectin)廣泛存在于植物細胞壁的初生壁和細胞中間片層,是一類雜多糖。果膠酶(Pectinase)可分解植物細胞壁中的果膠,使得細胞內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)釋放地更加完全,且分解產(chǎn)生的底物也有可能會促進乳酸菌的發(fā)酵。有研究表明,添加含果膠酶的組合酶制劑可以分解植物細胞壁中的果膠物質(zhì),提高了青貯的青貯品質(zhì)、營養(yǎng)價值和飼料利用率。除添加劑外,貯藏溫度也是影響青貯飼料品質(zhì)的重要因素之一。較高的貯藏溫度下青貯容易導致丁酸發(fā)酵,發(fā)酵品質(zhì)變差;較低的貯藏溫度下青貯則乳酸菌發(fā)酵較弱,需要較長的時間發(fā)酵來抑制不良微生物。目前,國內(nèi)外對沒食子酸、果膠酶等添加劑應(yīng)用在FTMR中的研究較少。

本文通過FTMR青貯試驗,研究了4種貯藏溫度下3種添加劑對FTMR真菌數(shù)量和青貯品質(zhì)的影響,探索適合FTMR的添加劑及FTMR的最佳貯藏溫度,為FTMR在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用提供科學依據(jù)和參考,以促進FTMR的深度推廣。

1材料與方法

1.1 試驗材料

苜蓿青貯(Medicago sativa L.)、燕麥干草(Avena sativa L.)、玉米(Zea mays L.)、玉米青貯、氯化鈉、豆粕(Glycine max(L.)Merr.)、預混料均來自于寧夏吳忠市鹽池縣巨峰農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司,按照表1制作TMR;布氏乳桿菌來自于中國農(nóng)業(yè)大學青貯加工實驗室;沒食子酸來自國藥集團化學試劑有限公司;果膠酶來自阿拉丁試劑(上海)有限公司;


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1.2 試驗設(shè)計

試驗設(shè)置了布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri,LB)、沒食子酸(Gallic acid,GA)、果膠酶(Pectinase,PE)3個添加劑,添加量分別為1×106cfu·g-1,0.3%和0.015U·g-1,溶于30mL蒸餾水中添加,對照組(CK)添加等量的蒸餾水;對4個處理的青貯原料分別設(shè)置了4個不同的貯藏溫度(10℃、20℃、30℃和40℃),共16個處理,每個處理3個重復。稱取300g的TMR裝入青貯袋中,用真空封口機封口。在溫度為(10℃、20℃、30℃和40℃)的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵,發(fā)酵7d之后開封,測定相關(guān)指標。

1.3 測定方法

采用田吉鵬的方法進行酵母菌和霉菌計數(shù);采用雷磁PHS-3C型pH計測定pH值;采用島津LC-20A型高效液相色譜儀(色譜柱:KC-811column,Shimadzu,日本;檢測器:SPD-M10AVP;流動相:3mmol·L-1高氯酸,流速1mL·min-1,柱溫50℃;檢測波長210nm,進樣量5μL)分析乳酸(Lactic acid,LA)、乙酸(Aceticacid,AA)、丙酸(Propionic acid,PA)和丁酸(Butyricacid,BA);采用苯酚-次氯酸鈉法測定氨態(tài)氮/總氮(NH3-N/TN,AN/TN);采用張麗英的方法計算干物質(zhì)(Dry matter,DM)含量;采用凱氏定氮法測定粗蛋白(Crude protein,CP)的含量,采用范氏法測定中性洗滌纖維(Neutral detergentfiber,NDF)和酸性洗滌纖維(Acid detergent fiber,ADF)的含量。

1.4 統(tǒng)計分析

采用Excel進行均值和標準誤的計算,采用SPSS 17.0軟件對溫度和添加劑進行統(tǒng)計分析,并用Duncan法對各測定數(shù)據(jù)進行多重比較,測定結(jié)果用平均值±標準誤表示。

2結(jié)果與分析

2.1 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR真菌數(shù)量的影響

由表2可知,當貯藏溫度為20℃時,添加LB、GA和PE顯著降低了FTMR中酵母菌的數(shù)量(P<0.05)。添加PE后在10℃、30℃和40℃均沒有發(fā)現(xiàn)酵母菌。

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2.2 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR發(fā)酵品質(zhì)的影響

由表3可知,隨著貯藏溫度的升高,各處理的pH值均顯著降低,CK、LB和GA處理組的pH值于30℃達到最低,PE處理組于40℃達到最低(P<0.05)。添加PE后,FTMR的pH值在10℃、30℃和40℃下均顯著低于其他處理組(P<0.05)。添加LB后,FTMR的AN/TN在各個貯藏溫度下均顯著高于其他處理組(P<0.05)。從10℃到30℃,隨著貯藏溫度的升高,各處理組中LA的含量顯著升高,但當貯藏溫度為40℃時,LB、PE處理組和CK的LA的含量均顯著低于30℃時LA的含量(P<0.05)。隨著貯藏溫度的升高,各處理組中AA和PA的含量均顯著升高(P<0.05),其中AA的含量于30℃時達到最高,PA的含量于40℃時達到最高。

添加劑對AN/TN的影響極顯著(P<0.01)。溫度對pH值、LA、AA、PA的影響均極顯著(P<0.01)。添加劑與溫度互作對pH值、AN/TN、LA、AA、PA的影響均極顯著(P<0.01)。

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2.3 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR營養(yǎng)成分的影響

由表4可知,LB處理組中,當貯藏溫度為40℃時其DM的含量顯著高于貯藏溫度為10℃和20℃時其DM的含量(P<0.05)。當貯藏溫度為10℃和20℃時,對照組中DM的含量顯著高于LB和PE處理組(P<0.05)。LB處理組中,當貯藏溫度為40℃時,其NDF和ADF的含量顯著低于其他貯藏溫度和其他處理組(P<0.05)。GA處理組中,當貯藏溫度為20℃和30℃時,其NDF的含量顯著低于其他貯藏溫度,當貯藏溫度為30℃時ADF的含量顯著低于其他貯藏溫度(P<0.05)。添加GA后,隨著貯藏溫度的升高,ADF的含量先顯著降低,于30℃時達到最低,之后又顯著升高(P<0.05)。添加LB后,隨著貯藏溫度的升高,ADF的含量逐漸降低且差異顯著(P<0.05)。LB處理組中,在各個貯藏溫度中,其CP的含量均顯著高于對照組(P<0.05)。GA處理組中,當貯藏溫度為10℃和40℃時,其CP的含量顯著高于對照組(P<0.05)。

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添加劑對DM、CP的影響極顯著(P<0.01),對NDF的影響顯著(P<0.05)。溫度對各營養(yǎng)成分影響均不顯著(P>0.05)。添加劑與溫度互作對DM和CP的影響極顯著(P<0.01),對NDF和ADF影響顯著(P<0.05)。

3討 論

3.1 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR真菌數(shù)量的影響

酵母菌和霉菌是青貯飼料中主要存在的真菌。酵母菌以糖為底物發(fā)酵生成二氧化碳和乙醇,造成糖分和干物質(zhì)的損失,利用乳酸導致青貯飼料的pH升高,而pH上升會促進其它雜菌的生長。本研究在FTMR中發(fā)現(xiàn)了酵母菌,沒有發(fā)現(xiàn)霉菌。當貯藏溫度為20℃時,添加布氏乳桿菌、沒食子酸和果膠酶顯著降低了FTMR中酵母菌的數(shù)量。添加果膠酶后在10℃、30℃和40℃均沒有發(fā)現(xiàn)酵母菌。有研究表明,添加布氏乳桿菌抑制了酵母菌和霉菌的數(shù)量,使得TMR的有氧穩(wěn)定性得以提高,但是對TMR的干物質(zhì)造成了一定的損失,這與本研究的結(jié)果類似,貯藏溫度為20℃時,添加布氏乳桿菌不僅降低了FTMR中酵母菌的數(shù)量,也降低了FTMR中干物質(zhì)的含量。對沒食子酸的研究表明,其對在體外對6種食物中常見的腐敗菌和食源性致病菌具有較好的抑制作用。本研究中,添加沒食子酸降低了FTMR中酵母菌的數(shù)量可能是由于沒食子酸的抑菌性能導致的。而添加果膠酶后在各個溫度下的酵母菌的數(shù)量顯著低于對照組,這可能是果膠酶水解產(chǎn)生的底物促進了乳酸菌的發(fā)酵,降低了pH值,最終抑制了酵母菌。

3.2 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR發(fā)酵品質(zhì)的影響

通常情況下認為青貯成功的青貯飼料其pH值應(yīng)該在4.2以下,其氨態(tài)氮/總氮應(yīng)該在10%以下。但也有研究表明,當青貯飼料干物質(zhì)含量較高時,即使pH值略高于4.2,青貯飼料也可以得到良好保存。本研究中由表5可知,FTMR原料的干物質(zhì)含量為51.59%,在干物質(zhì)含量相對較高的情況下,植物細胞水分較少、滲透壓較高,因此可以抑制不良微生物的活性,從而可以使得在pH值較高的情況下青貯飼料保存良好。一般認為乳酸菌在青貯發(fā)酵過程中的適宜溫度為19℃~37℃。本研究中,隨著貯藏溫度的升高,各處理的pH值降低,說明貯藏溫度逐漸達到了乳酸菌的適宜溫度,其中除果膠酶處理組外,其他處理組均于30℃達到最低pH。乳酸是青貯飼料發(fā)酵過程中產(chǎn)生的有益酸,也是飼料中碳水化合物在瘤胃中被瘤胃微生物發(fā)酵產(chǎn)生乙酸、丙酸等揮發(fā)酸的中間代謝產(chǎn)物。本研究中,布氏乳桿菌、果膠酶處理組和對照組中LA的含量于30℃達到最高,40℃時LA的含量反而降低,可能是由于貯藏溫度超過了最適溫度,抑制了乳酸菌的繁殖與生長,這與王文博等的研究結(jié)果相類似。乙酸是含量僅次于乳酸的有機酸,對青貯飼料有氧穩(wěn)定性有著積極的作用。本研究中,各處理AA的含量均于30℃達到最高,說明貯藏溫度為30℃時對FTMR的有氧穩(wěn)定性有利。添加布氏乳桿菌后,FTMR的AN/TN在各個貯藏溫度下均顯著高于其他處理組,這與丁良等的研究結(jié)果相類似,可能是由于布氏乳桿菌為異型發(fā)酵乳酸菌,其可以利用乳酸和水溶性碳水化合物產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸、二氧化碳等,造成FTMR干物質(zhì)的損失。本試驗中添加了布氏乳桿菌后,貯藏溫度為10℃和20℃時DM的含量低于對照組的情況印證了上述觀點。本研究中添加果膠酶后,FTMR的pH值在10℃、30℃和40℃下均顯著低于其他處理組,這與張玉丹等的研究結(jié)果相類似,可能是果膠酶的水解產(chǎn)物促進了乳酸菌發(fā)酵。

3.3 不同添加劑及貯藏溫度對FTMR營養(yǎng)成分的影響

植物性飼料經(jīng)過中性洗滌劑和酸性洗滌劑分解后的剩余物就是NDF和ADF,它們與飼料的適口性和消化率有關(guān),NDF和ADF的含量越多,那么可以被牲畜吸收的營養(yǎng)成分就越少。本研究中,添加布氏乳桿菌,貯藏溫度為40℃時,其NDF和ADF的含量顯著低于其他貯藏溫度和其他處理組,在各個貯藏溫度中,其CP的含量均顯著高于對照組。有研究表明,微生物添加劑主要通過兩方面來提高青貯飼料的品質(zhì),一方面是微生物在發(fā)酵過程中會消耗飼料中的一些營養(yǎng)物質(zhì),如碳水化合物等,同時產(chǎn)生一些酶類來降解飼料中的纖維素、半纖維素等大分子物質(zhì),使得NDF和ADF的含量降低。另一方面,隨著青貯過程的進行飼料中會損失一些DM,但CP的總量基本不變,相對的青貯飼料開封后CP的含量會增加。沒食子酸處理組中,當貯藏溫度為10℃和40℃時,其CP的含量顯著高于對照組。張雅麗等研究表明,沒食子酸在體外對6種食物中常見的腐敗菌和食源性致病菌具有較好的抑制作用。說明添加沒食子酸可能抑制了FTMR中的不良微生物,從而減少了可消化營養(yǎng)物質(zhì)的損失,減少了CP含量的損失。

4結(jié)論

綜上所述,貯藏溫度為30℃和40℃時FTMR的發(fā)酵品質(zhì)較好。當貯藏溫度為10℃、30℃和40℃時添加果膠酶可以提高FTMR的發(fā)酵品質(zhì)。當貯藏溫度為40℃時,添加布氏乳桿菌可以提高FTMR的營養(yǎng)品質(zhì)。

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