益生菌對生長豬生長性能、糞便微生物數量、養分表觀消化率和血清免疫指標的影響
摘要:本試驗旨在研究益生菌(短乳桿菌、酵母及其復合菌)對生長豬生長性能、糞便微生物數量·養分表觀消化率和血清免疫指標的影響。選取108頭平均體重為(13.6810.41) kg的“杜x長x大”三元雜交豬，隨機分為4組，即對照組、短乳桿菌組、酵母組和復合菌組，每組3個重復，每個重復9頭豬。試驗分2個階段，第1階段為第1一32天，第2階段為第3361天，全期共61 d。
結果表明:1)第1階段中，與對照組相比，各益生菌組的末重以及短乳桿菌組和復合菌組的平均日增重顯著提高(P<0.05)，短乳桿菌組和酵母組的料重比顯著降低(P< 0.05;第2階段中，復合菌組的末重顯著高于對照組(P<0.05);整個試驗期，與對照組相比，短乳桿菌組和復合菌組的平均日增重顯著提高(P<0.05)，復合菌組的料重比顯著降低(P<0.05} 0 2}在第32天，與對照組相比，各益生菌組糞便中酵母數量顯著升高(P<0.05)，短乳桿菌組和復合菌組糞便中乳酸菌數量顯著升高、大腸桿菌數量顯著降低(P<0.05);在第61天，與對照組相比，各益生菌組糞便中乳酸菌和酵母數量顯著升高(P<0.05)，短乳桿菌組和復合菌組糞便中大腸桿菌數量顯著降低(P<0.05) 0 3)在第32天，短乳桿菌組和復合菌組的粗蛋白質、鈣表觀消化率以及酵母組的鈣、磷表觀消化率較對照組顯著升高(P<0.05);在第61天，短乳桿菌組和復合菌組的粗蛋白質、鈣、磷表觀消化率以及酵母組的鈣、磷表觀消化率較對照組顯著提高(P<0.05) 0 4)在第32天，與對照組相比，各益生菌組的血清免疫球蛋白A (IgA)含量以及復合菌組的血清總蛋白}T P)、球蛋白(GLB}、免疫球蛋白G (IgG)含量顯著升高(P<0.05);在第61天，與對照組相比，短乳桿菌組的血清TP, GLB , IgA和IgG含量，酵母組的血清TP和IgG含量，復合菌組的血清GLB,IgA和IgG含量顯著升高(P<0.05)。
由此可見，飼糧中添加益生菌能夠改善生長豬的腸道微生態環境，提高飼糧養分表觀消化率，增強機體免疫功能，從而提高生長性能。
關鍵詞:生長豬;益生菌;生長性能;糞便微生物;養分消化率;免疫指標
中圖分類號:S816文獻標識碼:A文章編號:1006 267X (2015) 03-0829-09
隨著歐盟、日本和韓國等國家和地區全面禁止抗生素類添加劑在動物飼料中的應用，尋找綠色、安全的抗生素替代品成為當前研究的熱點。益生菌是一類含有活菌或其代謝產物的生物制劑，因其具有安全可靠、無殘留、無抗藥性、不污染環境等優點而倍受關注。大量研究表明，益生菌在提高仔豬的生長性能〔i7、改善腸道微生物區系平衡[Czl及提高機體免疫力[C37等方面具有積極作用，但目前益生菌在養豬生產中的研究多集中在斷奶仔豬階段，而對生長豬的應用研究不多。本試驗擬以13 50 kg生長階段的生長豬為試驗動物，通過在其飼糧中添加益生菌(短乳桿菌、酵母及其復合菌)，探討益生菌對生長豬生長性能、糞便微生物數量、養分表觀消化率和血清免疫指標的影響，為益生菌在豬生產中的科學應用提供理論和實踐依據。美藍培養基和馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PD A)培養基進行培養，測定步驟參照文獻[4」的方法進行。
1材料與方法
1.1試驗材料
短乳桿菌制劑，活菌數為3.74x109 CFU/g，由北京市農林科學院畜牧獸醫研究所動物營養研究室篩選并制備;飼料酵母，活菌數為1.0x10'0 CFU /g，市購。
1.2試驗動物及設計
采用單因素隨機試驗設計，選取108頭平均體重為(13.6810.41) kg的“杜x長x大”三元雜交豬，按性別、體重基本一致的原則隨機分為4組，每組3個重復，每個重復9頭豬。對照組(CT)飼喂基礎飼糧(不添加抗生素和益生菌)，短乳桿菌組(LB)飼喂基礎飼糧+1 g / kg短乳桿菌，酵母組(YT)飼喂基礎飼糧+1 g / kg飼料酵母，復合菌組(LBY)飼喂基礎飼糧+1 g/kg短乳桿菌+1 g /kg飼料酵母。試驗全期共61 d，分為2個階段，第1階段為第1一32天，采食10 } 20 kg生長豬飼糧，第2階段為第33 } 61天，采食20 } 50 kg生長豬飼糧。
1.3基礎飼糧和飼養管理
試驗用基礎飼糧為參照NRC (1998)配制的粉狀飼料，分為10 } 20 kg和20 } 50 kg 2個生長階段配制，其組成及營養水平見表1。試驗豬舍為半敞開式建筑模式，水泥地面圈養，自由采食和飲水。按豬場常規程序進行免疫、驅蟲、消毒和管理等。
1.4測定指標與方法
1.4.1生長性能
于試驗的第1,32和61天的08:00空腹稱重，每天觀察豬群生長情況，記錄飼料消耗情況，計算生長豬的平均日增重(ADG)、平均日采食量(AD-FI)和料重比(F/G) o
1.4.2糞便微生物數量的測定
分別于試驗的第32和61天，每個重復隨機選擇2頭豬采集新鮮糞樣，用于測定糞中乳酸菌和大腸桿菌的數量，菌群數量以每克糞便中所含細菌群落總數的對數[[1g (CFU/g)」表示。乳酸菌、大腸桿菌和酵母分別采用改良M RS培養基、伊紅
表1基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)
)預混料為每千克飼糧提供The premix provides thefollowing per kilogram of diets:V A 3 000 IU，VD3 300 IU，VE 38.5 mg} VK3 1.35 mg} VB, 2.5 mg，VB= 6.5 mg} VB}3.0 mg，VB,= 0.025 mg，煙酸nicotinic; acid 25 mg，泛酸pan-tothenic; acid 15 mg，生物素biotin 0.75 mg} Cu (as croppereulfate} 150 mg，Ee }aeferroue eulfate} 100 mg}`}n tae mintsulfate) 100 mg}Mn 35 mg}I 0.5 mg}Se 0.3 mgo
2)粗蛋白質、鈣、總磷為實測值，其余為計算值。CP,Ca and TP are measured values，w hile the others are〔ak;ulat-ed values.
1.4.3養分表觀消化率的測定
分別在試驗的第28 } 32天、第57 61天，每天選3個時間點從各重復中均勻采集糞樣約200 g，加入20 mL10%鹽酸混勻后置于一20℃冰箱冷凍保存。飼糧和糞樣的粗蛋白質、鈣、磷含量按文獻[CS」的方法測定。養分表觀消化率計算公式如下:
養分表觀消化率(%)=100x
[1一。
式中:A為糞中某養分含量;B為飼糧中該養分含量;C為飼糧中的酸不溶灰分含量;D為糞中酸不溶灰分含量。
1.4.4血清指標
分別于試驗的第32,61天，每個重復隨機選擇2頭豬，前腔靜脈采血5 mL，分離血清后一20℃保存備用。采用HITA C HI-7020自動生化分析儀測定血清中總蛋白(T P)、白蛋白(ALBS、球蛋白CGLBJ ,葡萄糖(GLUE、尿素氮(UN)、總膽固醇}TCHO)、甘油三酷}TG)含量及谷丙轉氨酶SALT)和谷草轉氨酶BAST)活性，測定所用試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司;采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清中免疫球蛋白A }IgA)、免疫球蛋白G }IgG)含量，試劑盒購自美國B ethyl公司。
1.5數據處理
采用SPSS 19.0軟件的one}vay ANOVA程序進行單因素方差分析，以D uncan氏法進行多重比較，P<0.05為差異顯著。結果以平均值士標準差表示。
2結果
2.1益生菌對生長豬生長性能的影響
由表2可以看出，在第1階段，各組豬初重和平均日采食量均差異不顯著(P>0.05);與對照組相比，各益生菌組的末重顯著提高(P<0.05)，短乳桿菌組和復合菌組的平均日增重顯著提高(尸<0.05)，短乳桿菌組和酵母組的料重比顯著降低(P<0.05)。在第2階段，與對照組相比，復合菌組的末重顯著提高(P<0.05)，各益生菌組的平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著變化(尸>0.05)。整個試驗期，與對照組相比，短乳桿菌組和復合菌組的平均日增重顯著提高(P<0.05)，復合菌組的料重比顯著降低(P<0.05) o
表2益生菌對生長豬生長性能的影響
Table 2 Effects of probiotic、on growth performance of growing pigs
同行數據肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<o.os}，相同或無字母表示差異不顯著(P> o.os}。下表同。
2.2益生菌對生長豬糞便微生物數量的影響
由表3可以看出，在第1階段結束時，與對照組相比，各益生菌組糞便中酵母數量顯著升高(尸<0.05)，短乳桿菌組和復合菌組的乳酸菌數量顯著升高(P< 0.05 )，同時這2組的大腸桿菌數量顯著降低(P< 0.05 )。在第2階段結束時，與對照組相比，各益生菌組的乳酸菌和酵母數量顯著升高(尸<0.05)，短乳桿菌組和復合菌組的大腸桿菌數量顯著降低(P<0.05} o
表3Fffecte益生菌對生長豬糞便微生物數量的影響
Table 3 on faecal microflora number of crowing pigs 1g (CFU/g)
2.3益生菌對飼糧養分表觀消化率的影響
由表4可以看出，第1階段結束時，與對照組相比，短乳桿菌組和復合菌組的粗蛋白質、鈣表觀消化率顯著提高(P<0.05)，酵母組的鈣、磷表觀消化率顯著升高(P<0.05)。第2階段結束時，與對照組相比，短乳桿菌組和復合菌組的粗蛋白質、鈣、磷表觀消化率顯著提高(P<0.05)，酵母組的鈣、磷表觀消化率顯著提高(P<0.05} o
2.4益生菌對生長豬血清指標的影響
由表5可以看出，第1階段結束時，與對照組相比，各益生菌組的血清IgA含量顯著提高(P<0.05);復合菌組的血清TP, GLB , IgG含量顯著升高(P<0.05)。第2階段結束時，各益生菌組的血清Ig G含量顯著提高(P<0.05);短乳桿菌組的血清TP,GLB,IgA含量顯著提高(P<0.05);酵母組的血清TP含量顯著提高(P<0.05);復合菌組的血清GLB,IgA含量顯著提高(P<0.05}。
表5 益生菌對生長豬血清指標的影響
Tahle 5 Effectsof probiotic、()nserumindices of crowing pigs
3討論
3.1益生菌對生長豬生長性能的影響
益生菌作為一種活菌制劑，能夠在腸道內繁殖產生大量生物活性成分，有利于改善仔豬對營養物質的消化和吸收，促進機體的生長發育〔6-7]DaV15等[A]報道，短乳桿菌制劑能改善腸道菌群結構，提高斷奶仔豬的生長性能;Van Heugten等[9]研究發現，活性酵母能夠提高斷奶仔豬的日增重、降低料重比;陳文輝等D of認為，復合益生菌對斷奶仔豬的平均日增重和飼料利用率具有顯著的促進作用。然而，也有一些試驗結果顯示，益生菌對斷奶仔豬的平均日增重及飼料轉化率沒有顯著影響[D I-IZl。不同研究結果存在差異的原因可能與益生菌的菌種特性、菌種組合、添加比例以及動物的日齡、生理狀態和飼養環境條件等試驗因素有關[CI 37。從本試驗結果來看，飼糧中添加益生菌能夠改善生長豬的生長性能，但不同階段、不同菌種的改善程度不同。在13 } 30 kg階段(第1階段)，益生菌對平均日增重、料重比等生長性能指標的影響優于30 } 50 kg階段(第2階段)，這與Giang等CIl、毛倩等Clal、周盟等[IS]的研究結果相似。Gorke等[16]研究認為，益生菌通常在敏感期具有較好的促生長效果。斷奶后仔豬處于強烈的生長發育階段，消化系統和免疫系統尚未發育成熟，加上心理、環境和營養等應激因素的影響，容易引起胃腸道結構和功能發生顯著變化[CI}I，導致采食減少、生長受阻，此時應用益生菌可以恢復腸道菌群平衡和胃腸功能，效果明顯。隨著豬只的生長發育，生長豬群的消化系統發育較為完善，免疫力及對外界環境的抵抗能力均相對較強，益生菌對平均日增重的提高效果要差于日齡較小的豬體[[IA]Sanders等認為，與單一菌株的益生菌相比，復合的菌株或菌種具有更好的益生效果，但從本試驗結果看，短乳桿菌和酵母單一菌種在13 } 30 kg階段的促生長效果明顯，而復合菌在30 } 50 kg階段的效果更好。本試驗所用復合菌由短乳桿菌和酵母混合而成，如何發揮其最佳使用效果，還需對
2種菌的配伍比例、添加劑量和使用階段進一步研究確定。
3.2益生菌對生長豬糞便微生物數量的影響
仔豬生活條件發生改變(如斷奶、飼糧變化、應激等)時，容易引起胃腸道微生物區系的失調，表現為有益菌數量急劇減少、大腸桿菌等條件致病菌大量繁殖。本試驗發現，短乳桿菌和復合菌能增加生長豬糞便中乳酸菌數量，降低大腸桿菌數量，這與Huang等Czol的結果一致。Giang等ca認為，乳酸菌能夠抑制病原菌的主要原因是由于其可在腸道中產有機酸，降低了腸道pH，而大腸桿菌在pH低于5.5時難以生長。也有研究認為，乳酸菌可以通過競爭有限的微生物營養素從而有效抑制致病菌在腸道的生長和繁殖囚。另外，Naughton等}zz}和W hite等}zo研究均指出，酵母細胞壁中含有甘露聚糖，可直接結合某些腸道病原
菌，阻止其在腸豁膜的定植，從而改善胃腸環境和菌群結構。胡友軍等Czal研究也發現，在仔豬飼糧中添加酵母后能夠增加消化道中乳酸菌數量，降低大腸桿菌數量。本試驗中，與對照組相比，酵母組生長豬糞便中大腸桿菌數量雖無顯著變化，但酵母的數量卻顯著增加，乳酸菌數量有增高趨勢。由此可見，短乳桿菌、酵母等益生菌在調整生長豬腸道菌群組成等方面具有積極作用，從而增強腸道消化吸收機能，有利于豬群健康狀況和生產性能的改善。
3.3益生菌對飼糧養分表觀消化率的影響
消化率是衡量飼料的可消化性和動物的消化能力的重要指標[[2s]，而益生菌可促進養分消化率的提高。王志祥等[26]發現，在斷奶仔豬飼糧中添加乳酸桿菌，可提高飼糧粗蛋白質、鈣和磷的表觀消化率。洪奇華等回證實，富酶活性酵母可提高仔豬的粗蛋白質表觀消化率。Kunavue等[zA]、曹廷富囚研究均表明，在生長豬飼糧中添加復合益生菌制劑可提高飼糧粗蛋白質、鈣和磷的表觀消化率。本試驗結果也表明，益生菌可顯著提高生長豬對飼糧中粗蛋白質、鈣、磷等營養物質的消化吸收，充分說明益生菌對養分消化率的提高是改善生長豬生長性能的一個重要因素。短乳桿菌可代謝產生有機酸，促進腸道蠕動和消化液分泌，有利于養分的消化吸收，并且這種偏酸環境也有利于被結合或鰲合的礦物質元素以游離態釋放，從而提高鈣、磷等的利用率[00-30。短乳桿菌在腸道定植后還能促進仔豬腸道上皮絨毛的生長發育，增大小腸吸收面積[oz-3o。此外，酵母本身含有豐富的消化酶(如蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等)，這也促進了腸道對大分子營養物質的消化吸收〔
3.4益生菌對生長豬血清免疫指標的影響
血液生化指標反映了機體營養代謝情況和各組織器官功能，也間接反映了動物的生產性能。一般來說，血清TP, ALB含量的升高表明肝臟合成蛋白質的能力加強，GLB含量的升高是免疫力提高的表現[C3sl。董曉麗等C3}7、劉輝等C3}7分別在斷奶仔豬和生長豬飼糧中添加羅伊氏乳桿菌和短乳桿菌后發現，仔豬血清中GLB含量顯著升高。本試驗結果顯示，各益生菌組血清中TP和GLB含量均較對照組升高，說明益生菌在改善肝臟的蛋白質合成和提高機體的免疫力方面具有積極的作用。
免疫球蛋白是介導動物體液免疫的主要免疫分子，也是反映機體免疫功能的重要指標，血清中IgG、免疫球蛋白M (IgM) ,IgA在血清中含量的升高表明機體免疫功能增強。有研究指出，乳酸菌在動物腸道定植后大量繁殖，不斷合成維生素、氨基酸等有益物質，不僅滿足了動物免疫器官的生長發育，也可以作為抗原物質刺激免疫器官的生長發育[os}。酵母細胞壁中成分(如甘露寡糖、葡聚糖)可以通過活性巨噬細胞觸發腸道上皮細胞或腸道相關性淋巴樣組織Th一的應答，從而增強機體免疫力[C39-aol。文靜等[3]在斷奶仔豬飼糧中添加屎腸球菌、李瑞等[4 }」在生長豬飼糧中添加復合益生菌，結果均發現血清IgG含量有不同程度的提高，機體的免疫功能增強。本試驗結果表明，各益生菌組生長豬血清中IgG , IgA含量均有不同程度的提高，說明益生菌可增強生長豬的免疫功能。
4結論
在飼糧中添加益生菌能夠改善生長豬的腸道菌群環境，促進飼糧中粗蛋白質、鈣、磷等養分的消化，增強機體的免疫功能，進而提高生長性能。
參考文獻:
[1]GIANG H H，V IET T Q，OGLE B，et a1.Growth per-....
略。。。。。。
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