在畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)長(zhǎng)期大量不合理使用抗菌藥物，會(huì)導(dǎo)致藥物殘留、細(xì)菌耐藥性等問(wèn)題，嚴(yán)重影響畜牧、水產(chǎn)品的安全質(zhì)量。此外，抗生素可通過(guò)生物富集或水體等途徑進(jìn)人人體，影響人類的健康安全。我國(guó)從2015年提出停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星等四種喹諾酮類抗菌藥物到2020年飼料中全面禁抗，如何保障畜禽腸道健康成為業(yè)內(nèi)關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題，人們不斷探索酸化劑、益生元、益生菌、植物提取物以及中草藥替代抗菌藥物的可行性。乳酸菌是廣泛存在于動(dòng)物腸道中具有重要生理功能的菌群，給動(dòng)物飼喂乳酸菌制劑，能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善腸道健康，提高機(jī)體免疫力，發(fā)揮抗菌作用，提高飼料利用率和動(dòng)物生產(chǎn)性能。發(fā)現(xiàn)，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。研究表明，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。研究表明，在飼料中添加植物乳桿菌可提高肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL-2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價(jià)。體外細(xì)胞試驗(yàn)證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優(yōu)于嗜酸乳桿菌。通過(guò)體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌IBM1具有較強(qiáng)的抗氧化能力。植物乳桿菌代謝產(chǎn)物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px的活性。前期研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料以15%比例替換蛋雞配合飼料，可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，提高經(jīng)濟(jì)效益，但其作用機(jī)制尚不明確。本試驗(yàn)旨在研究植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞血液抗氧化指標(biāo)及疫苗免疫抗體水平以、主要臟器指數(shù)的影響，為乳酸菌發(fā)酵飼料在蛋雞生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1乳酸菌發(fā)酵原液

乳酸菌發(fā)酵原液，主要由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等乳酸菌混合培養(yǎng)而成，有效微生物20億/mL，陰涼避光處保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

1.1.2試劑盒

禽流感H9N1抗體(AIV-H9N 1Ab)檢測(cè)試劑盒、雞新城疫抗體(NDV Ah)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海勁馬科技生物有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒(WST-1法)、丙二醛(MDA )測(cè)定試劑盒(TBA法)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶( GSH-Px )、總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.1.3儀器設(shè)備 

MK3酶標(biāo)儀；UV-2600i紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物與處理

選取288只37周齡健康的海蘭蛋雞，隨機(jī)分為4組，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)12羽蛋雞。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧(表1)；第2、3、4組為試驗(yàn)組，分別飼喂含5%乳酸菌發(fā)酵飼料+95%基礎(chǔ)日糧、10%乳酸菌發(fā)酵飼料+90%基礎(chǔ)日糧和15%乳酸菌發(fā)酵飼料+85%基礎(chǔ)日糧的混合日糧。預(yù)試期7天，試驗(yàn)期60天。

2.1乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞血槳抗氧化能力的影響

試驗(yàn)至30天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對(duì)照組，SOD活性極顯著高于對(duì)照組及第2組(P<0.01)；MDA的含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。

試驗(yàn)至60天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對(duì)照組和第2組(P<0.05)，第4組蛋雞血漿SOD活性極顯著高于對(duì)照(P<0.01)，第2、3組蛋雞血漿SOD活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)組蛋雞血漿MDA的含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，第4組顯著低于第2組(P<0.05)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(表2)。

3.1乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞杭氧化能力的影響

體外或動(dòng)物試驗(yàn)也已證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有清除活性氧的作用。等體外細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強(qiáng)的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優(yōu)于嗜酸乳桿菌。體外試驗(yàn)證明，從傳統(tǒng)發(fā)酵飲料中分離的植物乳桿菌DMs清除自由基的作用更強(qiáng)。體外試驗(yàn)證明，嗜酸乳桿菌清除能力相對(duì)較強(qiáng)。通過(guò)體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌KM1具有較強(qiáng)的抗氧化能力。研究認(rèn)為植物乳桿菌KM1通過(guò)改變磷酸苷油激酶。α-甘油磷酸氧化酶、丙酮酸氧化酶和NADH過(guò)氧化物酶的表達(dá)水平來(lái)緩解氧化應(yīng)激。植物乳桿菌JLAU103中分離、純化一種酸性胞外多糖(EPS )，體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其對(duì)自由基具有較強(qiáng)的清除能力。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌KLDS 1.0386具有清除經(jīng)自由基和脂質(zhì)抗氧化能力。植物乳桿菌KLDS 1.0386顯著降低了LPS對(duì)小鼠肝組織損傷、TNF-α和IL-6水平以及髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性。報(bào)道，植物乳桿菌代謝產(chǎn)物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，給蛋雞飼喂含5%、10%和15%植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料的混合日糧，可顯著提高蛋雞血漿SOD、GSH-Px和T-AOC活性，顯著降低血漿MDA含量，反映了飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料能提高機(jī)體清除自由基的能力和降低脂肪氧化損傷，對(duì)細(xì)胞和組織具有顯著的保護(hù)作用。可見(jiàn)，利用植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料飼喂蛋雞是十分有益的。

3.2乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞禽流感和新城疫免疫杭體水平的影響

將植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌添加飲水或飼料中，可提高家禽的免疫功能。報(bào)道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。報(bào)道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。在飼料中添加植物乳桿菌，提高了肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL -2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液，可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價(jià)。用嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液給雛雞飲水，顯著提高了血清IgG和新城疫疫苗免疫抗體水平。給肉雞飼喂添加植物乳桿菌L-137的飼料，顯著提高了肉雞脾臟IL-12β、IFN-β和IFN-y的基因表達(dá)水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在蛋雞日糧中飼喂乳酸菌發(fā)酵飼料均能提高禽流感H9N1抗體水平，試驗(yàn)至30天，第2、4組極顯著高于對(duì)照組，試驗(yàn)至60天，試驗(yàn)組極顯著或顯著高于對(duì)照組。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)試驗(yàn)組新城疫抗體水平極顯著或極顯著高于對(duì)照組。可見(jiàn)，給蛋雞飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料可提高蛋雞疫苗免疫抗體水平，提高蛋雞的抗病力，值得推廣應(yīng)用。

3.3乳酸菌發(fā)酵飼料對(duì)蛋雞臟器指數(shù)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，用乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)雞脾臟指數(shù)呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢(shì)，15%乳酸菌發(fā)酵飼料+85%基礎(chǔ)日糧組蛋雞的脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組。在肉雞飼料中添加植物乳桿菌，可顯著提高脾臟指數(shù)。給肉雞飲用植物乳桿菌菌液，脾臟指數(shù)也呈現(xiàn)明顯的增加趨勢(shì)。研究了副干酪乳桿菌KL1和植物乳桿菌亞種的作用，發(fā)現(xiàn)與自痢沙門氏菌感染組相比，益生菌治療組和益生菌預(yù)防組農(nóng)大3號(hào)矮種雞的脾臟指數(shù)顯著增加。在雞飲水中添加0.3%的乳酸菌微生態(tài)制劑，與對(duì)照組雞比較，脾臟指數(shù)提高了67.14%。在基礎(chǔ)日糧中分別添加1.0%、2.0%的乳酸凍干菌菌粉，肉雞脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組。顯然，以植物乳桿菌為代表的乳酸菌具有提高脾臟體重比的作用，與其增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能的作用是一致的。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂乳酸菌發(fā)酵飼料，提高了蛋雞禽流感和新城疫疫苗免疫抗體水平，與脾臟指數(shù)提高有明顯的一致性。其原因可能是免疫器官發(fā)育是機(jī)體免疫功能的組織學(xué)基礎(chǔ)。但是，乳酸菌對(duì)免疫器官發(fā)育的影響受乳酸菌種類和攝人量的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，三株乳酸菌培養(yǎng)物均能顯著提高肉雞脾臟指數(shù)，其中兩株乳酸菌培養(yǎng)物顯著提高胸腺指數(shù)，一株乳酸菌培養(yǎng)物顯著提高法氏囊指數(shù)。報(bào)道，在飼料中添加1.0 x 108 CFU/g約氏乳桿菌，對(duì)育成期蛋雞脾臟指數(shù)沒(méi)有顯著的影響。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂5%乳酸菌發(fā)酵飼料+95%基礎(chǔ)日糧組、10%乳酸菌發(fā)酵飼料+90%基礎(chǔ)日糧組，蛋雞脾臟指數(shù)與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。可見(jiàn)，菌種、劑量選擇是至關(guān)重要的。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用5%~15%乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，蛋雞肝臟指數(shù)顯著低于基礎(chǔ)日糧組，與已有報(bào)道不一致。在飼料中添加植物乳桿菌，對(duì)肉雞肝臟指數(shù)沒(méi)有顯著影響。報(bào)道，在育成期蛋雞飼料中添加1.0x108 CFU/g約氏乳桿菌，對(duì)肝臟指數(shù)沒(méi)有顯著的影響。可能與本試驗(yàn)用乳酸菌發(fā)酵飼料替換基礎(chǔ)日糧，導(dǎo)致試驗(yàn)組飼料能量水平低于對(duì)照組有關(guān)。也可能與植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌及其代謝產(chǎn)物影響了肝臟脂肪代謝有關(guān)。給大鼠灌胃1.05x109、2.10x109、4.20x109 cfu/(kg·d)的乳酸菌懸液，其肝臟TG顯著低于肥胖組大鼠(陽(yáng)性對(duì)照)，高劑量組大鼠的肝體比顯著降低。關(guān)于乳酸菌影響動(dòng)物脂肪代謝的菌株篩選、有效劑量、作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

蛋雞飼糧中添加植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發(fā)酵飼料，可提高蛋雞抗氧化能力和免疫功能，以添加15%最佳。