2.1.2 酵母Z4培養方法

（1）一級放大培養：配制YPD液體培養基，500mL三角瓶裝200g，滅菌冷卻至室溫后，接活化菌種3～4環，35℃，160rpm，搖床培養至酵母數2億個/mL。

（2）二級放大培養：取培養液200g，添加20%糖化醪和0.3%尿素（按糖化醪量算）后，裝至500mL三角瓶中，接一級菌種5%，35℃，160rpm，搖床培養至酵母數>1億個/mL。

（3）一代酵母泥菌種：取清液1L，分裝2瓶，每個1000mL三角瓶裝500g，接二級菌種5%，35℃，160rpm，搖床培養1d。發酵結束，將菌液放到1L量筒中靜置分層3h，倒掉3/4上清液，獲得一代酵母泥菌種250g，酵母數＞1億/mL。

（4）二代酵母泥菌種：取清液1L，分裝2瓶，每個1000mL三角瓶裝500g，接種一代酵母泥菌種5%，35℃，160rpm，搖床培養1d。發酵結束，將菌液放到1L量筒中靜置分層3h，倒掉3/4上清液，獲得二代酵母泥菌種250g，酵母數＞1億/mL。

2.1.3 乳酸菌的培養方法

（1）配置MRS液體培養基1瓶，500mL三角瓶中裝200g。

（2）接10%新鮮酸奶至MRS液體培養基中，35℃，靜置培養1d。

（3）培養結束，采用MRS固體培養基涂板法，在35℃，培養3d，計數菌落數。

2.2 固體飼料發酵實驗

按照不同的乳酸菌添加方式分別制備4種固體飼料進行同步發酵實驗，在發酵過程中觀察飼料的變化情況，進行比較，發酵結束后檢測飼料的水分、蛋白含量。發酵工藝如圖3

2.2.1 飼料樣品的發酵（1#樣品）

取新鮮濕糟（水分約70%）500g放入發酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素，磷酸二氫鉀0.05%，1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，添加1%的乳酸菌菌液，攪拌均勻，35℃，培養2d（輔料添加比例及接種量按濕糟的絕干重計）。

2.2.2 飼料樣品的發酵（2#樣品）

取新鮮濕糟（水分約70%）500g放入發酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，攪拌均勻，35℃，培養24h。發酵24h后，添加1%的乳酸菌菌液，攪拌均勻，裝入密封塑料袋，35℃，厭氧發酵1d（輔料添加比例及接種量按濕糟的絕干重計）。

2.2.3 飼料樣品的發酵（3#樣品）

取新鮮濕糟（水分約70%）500g放入發酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，攪拌均勻，35℃，培養24h。發酵24h后，添加1%的乳酸菌菌液，攪拌均勻，35℃，好氧發酵1d（輔料的添加比例及接種量按濕糟的絕干重計）。

2.2.4 飼料樣品的發酵（4#樣品）

取新鮮濕糟（水分約70%）500g放入發酵塑料盒中，添加8%豆粕，1.8%尿素，磷酸二氫鉀0.05%，添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液，攪拌均勻，35℃，發酵培養48h（輔料的添加比例及接種量按濕糟的絕干重計）。發酵24h、48h時，攪拌物料，并觀察黑曲霉、酵母生長情況，及物料的水分、氣味變化。發酵結束，檢測粗蛋白、乳酸菌菌數、pH。

2.3 檢測方法

水分：快速水分測定儀法。

蛋白質：采用凱氏定氮法（參照國標GBT6432-1994）。

2.4 檢測結果及分析

四種樣品的發酵情況見表1。

為數據進行結果分析。整理如表1。

實驗結果表明：

（1）發酵初始時添加1%的乳酸菌，并進行好氧發酵（1#樣品）：

發酵過程，木薯渣蛋白 16.54%，物料水分維持在 56% 左右，沒有發現霉菌菌絲大量生長，物料pH4.5-5.5；發酵24h，有淡淡的霉味，酵母數達10億個/g；發酵48h，物料結塊，沒有乳酸味，乳酸菌未檢出，酵母數達16億個/g，產品蛋白24.79%，較原來提高了49.88%。

（2）發酵24h后添加1%的乳酸菌，并進行厭氧發酵（2#樣品）：

發酵過程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分維持在56%左右，沒有發現霉菌菌絲大量生長，物料pH4.5-5.5；發酵24h，有淡淡的霉味，酵母數達14億個/g；發酵48h，物料松散且有明顯乳酸味，乳酸菌數6億個/g，酵母數達16億個/g，產品蛋白25.81%，較原來提高了56.04%。

（3）發酵24h后添加1%的乳酸菌，并進行好氧發酵（3#樣品）：

發酵過程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分維持在56%左右，沒有發現霉菌菌絲大量生長，物料pH4.5-5.5；發酵24h，有淡淡的霉味，酵母數達14億個/g；發酵48h，物料輕微結塊，有輕微乳酸味，乳酸菌數3億個/g，酵母數10億個/g，產品蛋白27.68%，較原來提高了67.35%。

（4）發酵過程中沒有添加乳酸菌，并進行好氧發酵（4#樣品）：

發酵過程，木薯渣蛋白 16.54%，物料水分維持在 56% 左右，沒有發現霉菌菌絲大量生長，物料pH4.5-5.5；發酵24h，有淡淡的霉味，酵母數達14億個/g；發酵48h，物料結塊，沒有乳酸味，乳酸菌未檢出，酵母數5.8億個/g，產品蛋白24.6%，較原來提高了48.73%。

將表1所述實驗數據畫成折線圖以便于分析，得圖1。

由圖1可知，物料粘度隨淀粉比例的增加而增大，相同的溫度和剪切速率下，淀粉比例越大物料粘度越大，且淀粉比例大于15%時，粘度隨淀粉比例變化速度加快。

3 結論

綜上所述，發酵過程，木薯渣蛋白16.54%，物料水分維持在56%左右，沒有發現霉菌菌絲大量生長，物料pH4.5-5.5；發酵結束，添加乳酸菌的樣品蛋白提高率為 50% 以上，較空白樣（48.73%）高，酵母數都高于空白樣，且發酵24h添加乳酸菌的樣品，物料較疏松，乳酸菌數較多，有乳酸清香味，霉味較淡。

4 結論

通過本實驗分析，餐廚垃圾經初步固液分離后，淀粉比例對固液分離剩余物的粘度起到很大作用，比例大于15%時現象尤為顯著。所以，在餐廚垃圾固液分離剩余物的處理中，可通過適當降低漿料中淀粉比例以降低其粘度，提高固液分離效率及剩余物的處理效率。

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